[发明专利]一种重组人源III型胶原蛋白的纯化方法和制备方法有效
| 申请号： | 201710306215.X | 申请日： | 2017-05-03 |
| 公开（公告）号： | CN107033238B | 公开（公告）日： | 2020-09-01 |
| 发明（设计）人： | 贾芳苗;刘冬;邓飞 | 申请（专利权）人： | 河南多美康生物药业有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/78 | 分类号： | C07K14/78;C07K1/113 |
| 代理公司： | 北京坦路来专利代理有限公司 11652 | 代理人： | 汪送来 |
| 地址： | 450000 河南省郑州市航空港区黄海路与*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 iii 胶原 蛋白 纯化 方法 制备 | ||
1.一种重组人源III型胶原蛋白的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：将由具有表达出重组人源III型胶原蛋白能力的重组酵母菌发酵得到的发酵液进行第一次热处理，得到变性液，所述第一次热处理的温度为65-75℃；往所述变性液中加入硫酸铵至饱和度为28-30％，收集沉淀；用含18-22mM柠檬酸盐、48-52mM氯化钠、pH为5.8-6.2的第一缓冲液进行换液，溶解沉淀得到粗蛋白液；将所述粗蛋白液加入至层析柱，并用含18-22mM柠檬酸盐、145-155mM氯化钠、pH为5.8-6.2的第二缓冲液换液进行低盐洗脱；将第二缓冲液洗脱后的洗脱液用含18mM柠檬酸盐、245-255mM氯化钠、pH为5.8-6.2的第三缓冲液换液进行高盐洗脱，收集洗脱液；用30KD超滤膜包18-22mmol/L pH为5.8-6.2的柠檬酸盐缓冲液对第三缓冲液洗脱后的洗脱液进行脱盐换液，得到胶原蛋白溶液；对所述胶原蛋白溶液进行第二次热处理，所述第二次热处理的温度为65-75 ℃，时间为8-12min；
所述重组酵母菌的保藏编号为CGMCC No.12491。
2.一种重组人源III型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，其包括：培养具有表达出重组人源III型胶原蛋白能力的重组酵母菌，获取发酵液；
所述重组酵母菌的保藏编号为CGMCC No.12491；所述发酵液按权利要求1所述的重组人源III型胶原蛋白的纯化方法进行纯化，得到重组人源III型胶原蛋白。
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