[发明专利]一种抗肿瘤海蟑螂提取物及其制备工艺与检测方法与用途

说明书

技术领域：

本发明属于天然药物领域，具体涉及一种海蟑螂提取物及其制备方法与检测方法。

技术背景：

海洋生物海蟑螂Ligiaexotica(Roux)又名海蛆、海岸水虱，属节肢动物门，甲壳纲，海蟑螂科，广泛分布于我国沿海各地，是一种长年生活在海岸边的水陆两栖动物。

民间作为药物用于小儿疳积、癣、跌打损伤、疽痈初起等症。卞俊等研究，海蟑螂提取物具有一定的抗肿瘤活性。

本发明的发明人对海蟑螂已经进行了多年的研究，在对海蟑螂多年的持续研究中意外发现了一种独特的海蟑螂提取物，该提取物能够非常有效地提高海蟑螂提取物的抗肿瘤效果。

发明内容：

本发明的目的是提供一种海蟑螂提取物。

本发明的另一目的是提供该海蟑螂提取物的制备方法。

本发明的另一目的是提供该海蟑螂提取物含量测定方法。

本发明还提供了该海蟑螂提取物的注射剂药物剂型及其制备方法。

本发明还提供了该海蟑螂提取物注射液在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。

本发明还提供了该海蟑螂提取物在制备治疗肿瘤药物中的应用。

本发明的目的是通过以下方式实现的：

一种海蟑螂提取物，该海蟑螂提取物是采用如下方法制备的：

(1)将海蟑螂置烘箱内25℃～35℃烘干，采用气流粉碎机对干燥的海蟑螂进行超微粉碎，气流粉碎机的气流压力为700～900kPa，进料速度为170～190r·min^-1，分级频率为35～45Hz，粉碎时间为15～25min，得海蟑螂超微粉A；

(2)取步骤(1)所得海蟑螂超微粉A，加入25～35倍量的仿生提取溶媒，35～40℃水浴加热，搅拌提取0.5～2h，离心10～30min，离心速度2700～2900r/min，分别收集上清液B和沉淀C；上清液B浓缩，得浸膏D，备用，沉淀C备用；上述仿生提取溶媒是由0.1％～0.3％氯化钠、0.2％～0.4％胃蛋白酶、0.2％～0.4％胰蛋白酶及0.01mol·L^-1～0.03mol·L^-1盐酸配制成溶液；

(3)取步骤(2)所得沉淀C，进行高压脉冲电场提取，工艺条件为电场强度25～35kV/cm，脉冲数35～45，温度30～40℃，料液比为1g：30～40mL，加入浓度为80～90％的乙醇作为提取液，提取40～50min，提取液滤过，滤液回收乙醇，得浸膏E，备用；

(4)取步骤(2)所得浸膏D和步骤(3)所得浸膏E合并，混匀，进行柱层析分离；选用D101B型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1：10～12，上样体积10BV～12BV，水洗8BV～10BV除杂，以苯二甲酸二丁酯：0.2mol/L磷酸溶液＝1：4～6的洗脱剂10BV～14BV洗脱，流速为2BV/h～4BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，即得海蟑螂提取物。

该海蟑螂提取物优选采用如下方法制备的：

(1)将海蟑螂置烘箱内30℃烘干，采用气流粉碎机对干燥的海蟑螂进行超微粉碎，气流粉碎机的气流压力为800kPa，进料速度为180r·min^-1，分级频率为30Hz，粉碎时间为20min，得海蟑螂超微粉A；

(2)取步骤(1)所得海蟑螂超微粉A，加入30倍量的仿生提取溶媒，37℃水浴加热，搅拌提取1h，离心20min，离心速度2800r/min，分别收集上清液B和沉淀C；上清液B浓缩，得浸膏D，备用，沉淀C备用；上述仿生提取溶媒是由0.2％氯化钠、0.3％胃蛋白酶、0.3％胰蛋白酶及0.02mol·L^-1盐酸配制成溶液；

(3)取步骤(2)所得沉淀C，进行高压脉冲电场提取，工艺条件为电场强度30kV/cm，脉冲数40，温度35℃，料液比为1g：35mL，加入浓度为85％的乙醇作为提取液，提取45min，提取液滤过，滤液回收乙醇，得浸膏E，备用；

(4)取步骤(2)所得浸膏D和步骤(3)所得浸膏E合并，混匀，进行柱层析分离；选用D101B型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1：11，上样体积11BV，水洗9BV除杂，以苯二甲酸二丁酯：0.2mol/L磷酸溶液＝1：5的洗脱剂12BV洗脱，流速为3BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，即得海蟑螂提取物。

一种海蟑螂提取物的检测方法，该海蟑螂提取物是采用如下方法制备的：