[发明专利]一种提纯植物多糖的方法

权利要求书

1.一种提纯植物多糖的方法，其特征在于，将样品进行蛋白酶酶解，干燥后，利用三氟甲磺酸切割结合多糖的多肽，采用9-芴甲氧羰基法或叔丁氧羰基法将游离多肽的氨基端衍生化，用乙酸乙酯萃取去除多酚及衍生化的多肽物质，制备得到纯化过的多糖；

所述的蛋白酶酶解：将蛋白样品加入蒸馏水混匀，其底物浓度30~70 g/L，调节pH至8~9，温度45~55℃，加入蛋白酶与底物比为0.5~2.5%的碱性蛋白酶，酶解时间5~12 h，沸水浴灭酶10~20 min，离心取上清液，冻干；

所述的三氟甲磺酸切割结合多糖的多肽：准确称取绝干样品加入到预冷的样品管中，按0.3 mL/mg样品的比例加入三氟甲磺酸，快速封口，轻摇2~5 min使样品溶解，于4℃下保温30~60 min，偶尔摇动，样品管中加入少量2%溴酚蓝指示剂，于-20℃下预冷，在干冰甲醇浴的环境下，用预冷的60%吡啶滴定，直至溴酚蓝变成浅紫色或蓝色，此时溶液pH约为6.0，最后用去离子水透析并冷冻干燥。

2.根据权利要求1所述一种提纯植物多糖的方法，其特征在于，所述的9-芴甲氧羰基法：准确称取前述所制备的冻干样品，溶解于10%碳酸钠溶液中，样品浓度为1~5%，加入少量丙酮，在0~4℃条件下加入与样品质量相同的芴甲氧羰酰氯，搅拌反应4~12 h后，冷却，并用浓盐酸酸化到pH至2，100 mL乙酸乙酯萃取3~5次，将多酚和被保护的多肽溶于乙酸乙酯中，将水相过滤，经500 Da透析袋透析，去除小分子盐杂质，浓缩干燥得纯化的多糖。

3.根据权利要求1所述一种提纯植物多糖的方法，其特征在于，所述的叔丁氧羰基法：准确称取前述所制备的冻干样品放入烧杯中，倒入样品质量10 mL/g冻干样品的水溶解，将二碳酸二叔丁酯按照冻干样品重量的0.5~2倍的比例，溶解于10 mL/g冻干样品的1,4-二氧六环溶剂中，倒入上述烧杯，搅拌后用三乙胺调节pH至8~9，溶液变浑浊后继续搅拌20 h，然后用石油醚作溶剂进行萃取，分离出水溶液在冰浴条件下搅拌，用1 mol/L盐酸调节pH至2~3，溶液再次变浑浊，再往溶液中加入适量饱和氯化钠溶液，乙酸乙酯萃取3~5次，将多酚和被保护的Boc-多肽溶于乙酸乙酯中，将水相过滤，经500 Da透析袋透析，去除小分子盐杂质，浓缩干燥得纯化的多糖。