[发明专利]一种基于化学发光体系的硫化氢检测方法

说明书

本发明公开了一种基于化学发光体系的硫化氢检测方法，借助鲁米诺‑过氧化氢体系，构建用于检测硫化氢的化学发光体系，通过不同浓度的硫化氢测定各发光体系的发光信号，信号强度和硫化氢浓度呈线性相关，根据得到的线性关系用于待测样品中硫化氢浓度的检测。本发明能够直接用于快速定量检测硫化氢，原料易得、成本低、操作简单、重现性好而且灵敏度高，有望在生命科学及医学临床检测等领域得到广泛应用。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种基于化学发光体系的硫化氢检测方法。

背景技术

硫化氢（H₂S）已经被报道是生物体内扮演着重要功能的生物信号分子，它是继一氧化氮（NO）和一氧化碳（CO）之后被广泛认可的第三种气体递质。生物体内的硫化氢主要是三种酶反应的副产物产生的。硫化氢参与一系列的生理活动，比如保护血管流量和压力、调节细胞生长和死亡、减少缺血再灌注损伤、调节炎症以及与自由基反应产生的抗氧化效应等。生物体内硫化氢的浓度是受到严格控制的，正常血液中硫化氢浓度大约在30-100 µM。硫化氢浓度的异常与许多疾病有关，如高血压、动脉粥硬化、糖尿病、阿尔茨海默病等，实现对体内硫化氢的检测显得尤为重要。现阶段，研究人员开发出的主要检测方法有荧光法、表面增强拉曼法、电致化学发光法、气象色谱法等。但是这些方法均需要复杂而漫长的前期准备工作或贵重繁琐的仪器操作。因此，发展一种简单快捷的硫化氢检测方法是迫切需要的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种成本低、操作简单、重现性好的基于化学发光体系的硫化氢检测方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种基于化学发光体系的硫化氢检测方法，包括以下步骤：

步骤S1：制备辣根过氧化物酶催化的鲁米诺-过氧化氢化学发光体系，用BPCL微弱化学发光测量仪测定该体系的化学发光信号，得到第一发光强度；

步骤S2：将不同浓度的硫化氢分别和辣根过氧化物酶混合，然后分别加入到鲁米诺-过氧化氢化学发光体系内，用BPCL微弱化学发光测量仪测定各体系的化学发光信号，得到不同浓度硫化氢下体系的发光强度并结合第一发光强度，绘制标准曲线；

步骤S3：将待测样品和辣根过氧化物酶混合，然后加入到鲁米诺-过氧化氢化学发光体系内，用BPCL微弱化学发光测量仪测定该体系的化学发光信号，得到第二发光强度并结合标准曲线，实现待测样品中硫化氢浓度的检测。

进一步，所述步骤S1具体如下：

步骤S1-1：将辣根过氧化物酶溶液与过氧化氢溶液混合，室温反应数分钟，得到第一溶液；

步骤S1-2：将鲁米诺溶液添加到pH为7.0的Tris-HCl缓冲液中，得到第二溶液；

步骤S1-3：将第一溶液与第二溶液混合，得到辣根过氧化物酶催化的鲁米诺-过氧化氢化学发光体系，立即用BPCL微弱化学发光测量仪测定体系的化学发光信号，得到第一发光强度。

进一步，所述步骤S2具体如下：

步骤S2-1：将不同浓度的硫化氢分别与辣根过氧化物酶溶液混合，室温反应数分钟，然后再与过氧化氢溶液混合，室温反应数分钟，得到第一溶液；

步骤S2-2：将鲁米诺溶液添加到pH为7.0的Tris-HCl缓冲液中，得到第二溶液；

步骤S2-3：将第一溶液与第二溶液混合，立即用BPCL微弱化学发光测量仪测定各体系的化学发光信号，得到不同浓度硫化氢下体系的发光强度并结合第一发光强度，绘制标准曲线。

进一步，所述步骤S3具体如下：

步骤S3-1：将待测样品与辣根过氧化物酶溶液混合，室温反应数分钟，然后再与过氧化氢溶液混合，室温反应数分钟，得到第一溶液；