[发明专利]酪酸梭菌在制备预防或治疗慢性阻塞性肺疾病制剂中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及酪酸梭菌在制备预防或治疗慢性阻塞性肺疾病制剂中的应用，具体是用酪酸梭菌预防或治疗慢性阻塞性肺疾病，减少气流受限、改善肺部功能。

背景技术

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种气流受限呈不完全可逆和进行性发展状态的气道阻塞性肺部疾病。目前，COPD是世界上第四位的主要死亡原因，而在我国已居疾病负担序列的第一位。COPD病死率及致残率较高，据全球疾病负担研究项目估计，2020年COPD将占全球死因的第3位。COPD属严重公共卫生问题，目前已经被行业列入重大疾病慢病管理体系内。

目前临床常用治疗COPD的药物包括糖皮质激素、β₂-受体激动剂等。β₂-受体激动剂可扩张支气管、缓解气流受限，不能对气道病变进行有效的遏制。糖皮质激素是临床治疗COPD的首选药物，但长期或较高剂量应用激素会导致药效低、副作用大。目前COPD缓解期的治疗仍缺乏行之有效的策略，肺功能的恶化仍然无法避免。

本发明人经过研究发现，酪酸梭菌能够有效预防或治疗慢性阻塞性肺疾病，安全没有任何毒副作用，效果优于双歧杆菌，且未见相关研究报道，特申请此发明专利。

发明内容

本发明的目的是提供一种能预防或治疗慢性阻塞性肺疾病的制剂，该制剂由酪酸梭菌制成。

本发明的制剂的制备优选是通过下述步骤实施的，但不局限于此制备工艺，公知的能实现的制备工艺均可以：采取可能含酪酸梭菌的样品，然后将样品置于灭菌厌氧瓶内，吹入氮气同时充分混合，迅速从中取2克样品加入18mL灭菌的稀释液中，吹入氮气同时充分混匀，在无菌操作台内，进行10^-1、10^-2、10^-3、10^-4，10^-5，10^-6，10^-7梯度稀释，取10^-5，10^-6，10^-7三个稀释梯度，分别涂布于酪酸梭菌选择性单菌落分离固体培养基上，置于厌氧罐内，厌氧37℃下培养48小时，选择长势良好的单菌落分别接种于液体扩增培养基中，置于厌氧罐内，厌氧37℃下扩增培养48小时。将所得培养液离心(12000rpm)分离出菌体后，将菌体冷冻真空干燥，调制出干燥菌粉，然后进行菌种鉴定和毒性试验，将鉴定为酪酸梭菌的干燥菌粉按需要比例添加辅料制成片剂、胶囊、散剂、粉剂或液体制剂等各种剂型，也可加入其他活菌或低聚果糖等低聚糖起到协同作用。

酪酸梭菌选择性单菌落分离固体培养基优选但不局限于：纯化水1L，蛋白胨40.0g，Na₂HPO₄5.0g，K₂HPO₄1.0g，NaCl 2.0g，MgSO₄0.1g，葡萄糖2.0g，琼脂25.0g，调pH 7.6，116℃灭菌20分钟，待其冷至50℃左右，加入卵黄液50.0mL，加入终浓度为200μg/mL的硫酸多粘菌素B，加入终浓度200μg/mL的新霉素，充分混匀后，分注于平皿中。

酪酸梭菌液体扩增培养基优选但不局限于：纯化水1L，胰蛋白胨10.0g，牛肉浸膏10.0g，酵母浸膏3.0g，葡萄糖5.0g，NaCl 5.0g，可溶性淀粉1.0g，半胱氨酸盐酸盐0.5g，醋酸钠3.0g，琼脂0.5g，调pH 6.6-7.0，121℃，灭菌15分钟。

为进一步具体说明本发明，发明人利用上述方法通过酪酸梭菌选择性单菌落分离固体培养基分离鉴定出了无毒性的酪酸梭菌，本发明所述酪酸梭菌并不局限于为说明本发明所述的菌，只要无毒性的酪酸梭菌均是本发明所述，均在本发明的保护范围内。

本发明所述酪酸梭菌优选但不限于酪酸梭菌DF96101保藏编号CGMCC0313.1或丁酸梭菌QA-08保藏编号CGMCC 2303。

本发明实施说明中优选使用的酪酸梭菌的细菌学性质：

1、为说明本发明，本发明利用上述方法分离的酪酸梭菌为酪酸梭菌DF96101保藏编号CGMCC 0313.1或丁酸梭菌QA-08保藏编号CGMCC 2303。

2、菌落形态

显微镜观察：长3.0-6.0微米，宽0.6-1.2微米，直杆或梭状菌，革兰氏染色阳性，产芽孢，孢子欠端生。

平板形态：菌落圆形，边缘不整齐，稍凸，不透明，颜色淡黄，表面无光泽。

3、生理生化鉴定