[发明专利]一种嗜酸乳杆菌S-层蛋白分子印迹传感器及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种嗜酸乳杆菌S-层蛋白分子印迹传感器，其特征在于，所述传感器以二氧化硅为载体，S-层蛋白为模板分子，甲基丙烯酸为功能单体，二甲基丙烯酸乙二醇酯为交联剂；所述分子印迹传感器由以下方法制得：

（1）将单分散性良好的SiO₂颗粒超声分散在乙醇溶液中，浓度为0.3g/mL；

取10mL分散好的SiO₂乳液至小烧杯，然后载玻片垂直插入烧杯中固定好，通过垂直沉降法，使胶体颗粒自组装在洁净的载玻片上，形成三维有序的胶体颗粒阵列，待溶剂完全挥发后，得到具有三维有序排列结构的SiO₂胶体晶体，形成光子晶体薄膜；

（2）将光子晶体薄膜在500℃条件下处理1h，以增强其机械性能；

然后对其进行表面修饰，具体操作为：将其浸泡在piranha洗液中12h，使SiO₂微球表面暴露出羟基基团，然后用双蒸水清洗干净并用氮气流吹干；接下来将光子晶体薄膜浸泡于含有5％APTES的乙醇溶液中1h，使微球表面产生氨基基团；然后将光子晶体薄膜浸泡于含有5％戊二醛的PBS溶液2.5h，戊二醛一端的醛基与SiO₂微球上的氨基发生反应，使微球醛基化；

然后以PBST洗液多次清洗光子晶体薄膜，并将清洗后的薄膜置于浓度为1mg/mL S-层蛋白的PBS溶液中，4℃下保持12h，使S-层蛋白分子上的氨基与SiO₂微球表面的醛基缩合，实现蛋白在微球表面的共价连接；

（3）配置水凝胶预聚液：甲基丙烯酸0.5mL，二甲基丙烯酸乙二醇酯0.25mL，甲醇1mL，将配置好的预聚液放置在4℃下静置12h，使其充分混合；然后向预聚液中加入10mg光引发剂偶氮二异丁腈，超声10min使其混合均匀，并持续通入氮气10min以排尽其中的氧气；

（4）取步骤（2）制备的光子晶体基片，在其表面覆盖一层75mm×25mm的有机玻璃，并用夹子固定好，形成上层为PMAA有机玻璃，中间为光子晶体薄膜，下层为载玻片的三明治结构；用移液枪预聚液缓慢地注入玻璃缝隙，在毛细作用力下预聚液会进入玻璃空隙，直到光子晶体薄膜的颜色变透明则预聚液得到了充分浸透；

在冰浴条件下用波长为365nm的紫外灯照射30min引发预聚液发生光聚合；

（5）将步骤（4）处理后的光子晶体薄膜浸泡于2%氢氟酸溶液中，除去SiO₂颗粒，得到三维有序的反蛋白石光子晶体水凝胶膜；接着将水凝胶膜在NaOH和NaClO的混合溶液中处理6小时，然后用醋酸的SDS溶液反复清洗三次以除去水凝胶膜中的模板蛋白，即获得嗜酸乳杆菌S-层蛋白分子印迹传感器。

2.权利要求1所述的嗜酸乳杆菌S-层蛋白分子印迹传感器在检测嗜酸乳杆菌S-层蛋白中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述嗜酸乳杆菌S-层蛋白的浓度与Bragg衍射峰的位移呈线性关系。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述传感器的响应速度小于3分钟。

5.权利要求1所述的嗜酸乳杆菌S-层蛋白分子印迹传感器在嗜酸乳杆菌S-层蛋白富集中的应用。