[发明专利]一株维生素B2单克隆抗体杂交瘤细胞株GZ-4及其应用

说明书

一株维生素B2单克隆抗体杂交瘤细胞株GZ‑4及其应用，属于食品安全免疫检测领域。本发明维生素B2单克隆抗体杂交瘤细胞株GZ‑4，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，保藏编号为CGMCC No.13094。此细胞株分泌的单克隆抗体，对维生素B2具有较好的特异性和检测灵敏度（IC₅₀值为11 ng/mL），可以用于对牛奶、维生素饮料、婴幼儿食品中维生素B2的检测，具有实际应用价值。

技术领域

本发明涉及一株维生素B2单克隆抗体杂交瘤细胞株GZ-4及其应用，属于食品安全免疫检测领域。

背景技术

维生素B2，又名核黄素，为体内黄酶类辅基的组成部分（黄酶在生物氧化还原中发挥递氢作用）。当缺乏维生素B2时，就影响机体的生物氧化，使代谢发生障碍。其病变多表现为口、眼和外生殖器部位的炎症，如口角炎、唇炎、舌炎、眼结膜炎和阴囊炎等。维生素B2是水溶性维生素，容易消化和吸收，不能在体内蓄积，因此只有通过日常膳食摄取维生素B2，维生素B2广泛存在于酵母、肝、肾、蛋、奶、大豆等中。儿童生长发育期、妇女妊娠哺乳期、创伤期由于机体需求量大，日常饮食摄入可能无法满足需要，因此需要补充维生素B2。

中国居民膳食维生素B2推荐摄入量男士1.5 mg/天，女士1.2 mg/天，妊娠期间需要1.6 mg/天，哺乳6个月内要摄取1.8 mg/天，之后的6个月为1.7 mg/天。食品营养强化剂使用卫生标准GB14880-94规定了维生素B2的用量，维生素B2强化婴儿食品配方中需要8～14 mg/kg，妊娠食品配方4～22 mg/kg。

目前维生素B2含量分析方法有微生物法、分光光度法、色谱法。色谱法应用最为广泛，包括气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、气质联用(GC-MS)、液质联用 (LC-MS)、超临界流体色谱(SFC)、毛细管电泳(CE)等的仪器方法，但这些方法需要昂贵的仪器、专业的操作人员，且样品前处理复杂，成本高，时间长，不能实现大量样品的快速检测，因此建立快速简便的维生素B2检测方法具有重要意义。酶联免疫法（ELISA）是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，检测时对样本的纯度要求不高而且操作简便，适用于大量样本的现场快速检测。建立高效的免疫学检测方法，筛选高特异性的单克隆抗体是重要前提。

发明内容

本发明的目的是提供一株维生素B2单克隆抗体杂交瘤细胞株GZ-4，由该细胞株制备的抗体对维生素B2具有较好特异性和检测灵敏度，可以用来建立维生素B2的免疫学检测方法。

本发明的技术方案：一株维生素B2单克隆抗体杂交瘤细胞株GZ-4，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，保藏编号为CGMCC No.13094。

维生素B2单克隆抗体，它由所述保藏编号为CGMCC No.13094的维生素B2单克隆抗体杂交瘤细胞株GZ-4分泌产生。

所述维生素B2单克隆抗体的应用，用于食品安全检测中维生素B2的分析检测。

本发明提供的维生素B2单克隆抗体杂交瘤细胞株GZ-4的制备基本步骤为：

1）完全抗原的合成：

称取8.42 mg VB2（维生素B2）于1 mL无水DMF中，加入18.15 mg CDI（羰基二咪唑），40℃水浴避光搅拌，活化1 h；另取5 mg BSA溶解于2 mL、0.05M、pH 9.6的CB溶液中，将上述活化后的VB2溶液缓慢逐滴加入BSA溶液中，室温搅拌反应过夜，即得VB2完全抗原混合液，4℃透析3天，通过透析分离完全抗原和未偶联的小分子半抗原，并通过紫外吸收扫描方法鉴定；