[发明专利]CK-MB融合蛋白及其制备方法和检测试剂盒

权利要求书

1.一种CK-MB融合蛋白，其特征在于，由CK-M蛋白和CK-B蛋白通过Loop连接形成，所述Loop的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的CK-MB融合蛋白，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.权利要求1或2所述的CK-MB融合蛋白的编码基因。

4.权利要求1或2所述的CK-MB融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将人源性CK-M蛋白和CK-B蛋白的编码基因序列用Loop的核苷酸碱基偶联在一起，克隆到表达载体pET28a的多克隆位点BamH I/Xho I中，得到表达质粒pET28a-CKMB；

将表达质粒pET28a-CKMB转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，接种到LB培养基中于37℃培养至菌液光吸收值(OD)达到1.0，加入1μg/mL的IPTG诱导表达；

培养结束后培养液用Tris-盐酸缓冲液搅拌振荡使细菌沉淀重悬，超声波破壁，离心取上清，依次过镍柱、强阴离子交换柱Q柱和Superdex G200分子筛层析柱，得到纯化的CK-MB蛋白。

5.一种用于检测CK-MB的试剂盒，包括CK-MB蛋白的阳性对照品，其特征在于，所述CK-MB蛋白为权利要求1或2所述的CK-MB融合蛋白。

6.一种用于检测CK-MB的免疫荧光试剂盒，其特征在于，包括含冻干的荧光微球复合体的枪头、免疫荧光试纸卡、含样品缓冲液的冻存管，和权利要求1或2所述CK-MB融合蛋白制备的阳性对照品；其中，

荧光微球复合体：将稀土荧光微球通过碳二亚胺和羟基硫代琥珀酰亚胺将羧基活化，然后以羧基化的稀土荧光微球作为标记载体，与CK-MB单抗中-NH₂共价结合；

免疫荧光试纸卡包括CK-MB检测试纸，检测试纸由吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫依次搭接贴于PVC衬板上构成，硝酸纤维素膜上的检测线位置包被有抗CK-MB单抗，质控线位置包被有羊抗小鼠多抗；检测试纸固定在塑料底卡上并且表面用面卡压紧，面卡在对应检测试纸的样品垫和硝酸纤维素膜的部位分别预留加样孔和观察窗。

7.根据权利要求6所述的用于检测CK-MB的免疫荧光试剂盒，其特征在于，还包括干燥剂；全部试剂均封装在铝箔袋中，真空封口，4℃保存。

8.根据权利要求6所述的用于检测CK-MB的免疫荧光试剂盒，其特征在于，所述样品缓冲液为含有质量体积比0.25%酪蛋白和40mM EDTA的PB缓冲液。

9.根据权利要求6所述的用于检测CK-MB的免疫荧光试剂盒，其特征在于，还包括阳性对照品稀释液，所述阳性对照品稀释液为含有质量体积比6% BSA和浓度5mM葡萄糖的PB缓冲液。