[发明专利]一种莲藕酚类化合物指纹图谱的构建方法

说明书

技术领域

本发明属于食品分析及质量检测技术领域，具体涉及一种莲藕酚类化合物指纹图谱的构建方法。

背景技术

莲藕是我国栽培最广、销售量和销售范围最大的水生蔬菜。随着莲藕产业规模的逐渐壮大，产品品质及个性化需求不断增加，产业发展对品种选育提出了更高要求。藕莲品种选育从单一的高产目标向营养和感官等品质改良方向转移，而以满足加工、保鲜、消费习惯等个性特征的育种目标成为当前研究的热点(柯卫东,2003)。据早期文献报道，在“国家种质武汉水生蔬菜资源圃”中保存的藕莲资源已达310份，而人工选育品种达12种(柯卫东，2015)。丰富的种质资源为个性化加工和产品开发提供基础保障，同时也对产品质量控制提出挑战：如何区分鉴别不同特性的品种。

韩延闯(2004)、刘月光(2006)、全志武(2008)和李长春(2011)均采用分子生物学技术研究了莲藕种质资源的遗传多态性，并基于生物指纹图谱应用于品种的鉴别。但相关技术在实际生产应用中较受局限，且研究对象均为莲藕叶，有效用于藕原料鉴别的技术相对缺乏。基于物质群体的认识，指纹图谱可实现资源真实性鉴别、质量一致性评价和产品稳定性分析，尤以色谱指纹图谱的研究应用最为普遍(李强，2013)，而莲藕的色谱指纹图谱技术尚未见报道。

植物多酚是一类存在于植物体内的多羟基酚类化合物的总称，主要包括黄酮类、单宁、花色苷类、酚酸类等，其含量、组成及结构的多样性被广泛应用于化学指纹图谱的构建，如三叶青叶指纹图谱(范世明，2016)、丹参指纹图谱(周毅生，2009)、烤烟指纹图谱(李军营，2009)等。莲藕中含有丰富的酚类物质，其相关研究报道主要集中在提取、纯化以及少数组分的定量和定性分析(王清章，2004；严守雷，2005，2006，2007；刘焕云，2011；覃海明，2015；徐燕燕2016)，莲藕中酚类化合物的指纹特征尚不清晰。研究莲藕酚类化合物指纹图谱对完善莲藕加工技术体系，实现加工原料的质量控制具有重要意义。

现有相关技术存在的问题归纳为以下两点：(1)莲藕的种质资源丰富，相关的品种鉴别技术均依托于幼嫩叶片的生物指纹图谱，尚无法直接针对藕原料进行品种鉴别，亦无法应用于藕产品质量控制。(2)基于酚类化合物多样性和复杂性的化学指纹图谱技术广泛应用于植物资源的品种鉴别，然而莲藕酚类化合物的指纹特征尚不清晰，在莲藕品种鉴别中的应用前景亦不明确。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种莲藕酚类化合物指纹图谱的构建方法，其针对莲藕皮部和节部的酚类化合物构建二元指纹图谱，从酚类化合物分布、含量和组成等多角度反映品种之间的差异，有利于提高莲藕品种鉴别的准确性。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种莲藕酚类化合物指纹图谱的构建方法，其包括如下步骤：

1)莲藕洗净后切分为藕段和藕节，藕段刨取皮部，藕节切除须根，得到藕皮和藕节两种供试部位，分别粉碎至5-20目待用；

2)将步骤1)中粉碎的藕皮和藕节分别进行酚类化合物浸提处理，得藕皮酚类化合物供试液和藕节酚类化合物供试液；

3)以步骤2)得到的藕皮酚类化合物供试液和藕节酚类化合物供试液为试样，分别进行高效液体色谱检测，得藕皮酚类化合物指纹图谱和藕节酚类化合物指纹图谱；

4)重复步骤1)、2)和3)得到多个不同品种莲藕的藕皮和藕节相应的酚类化合物指纹图谱，通过Chempattern软件进行指纹图谱的比对分析，分别确定8个共有峰，并以共有峰分别建立藕皮酚类化合物标准指纹图谱和藕节酚类化合物标准指纹图谱。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以有如下进一步的具体化。

具体的，步骤1)中藕皮的厚度为0.8-1.2mm。

具体的，步骤2)中的酚类化合物浸提处理的具体内容为：按1g:8～12mL的料液比将步骤1)中粉碎的供试部位加入预冷至4℃的浸提液中，在8000～12000r/min的转速下均质处理3～5min，匀浆经10000r/min离心5min，固液分离得一次提取液和残渣，残渣以1g:8～12mL的料液比加入预冷至4℃的浸提液，在6000～8000r/min的转速下均质处理3～5min，匀浆经10000r/min离心5min，固液分离得二次提取液和残渣；合并一次提取液和二次提取液，在50℃水浴下真空浓缩至约10mL，全部转移至25mL容量瓶中并用甲醇定容，采用0.45μm针头过滤器过滤后得到相应的酚类化合物供试液。

具体的，所述浸提液为甲醇、甲酸和水的混合液，混合液中甲醇的浓度为80wt％，甲酸的浓度为2wt％。