[发明专利]猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA定量检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA定量检测试剂盒，包括预包被酶标板和酶标记抗体，所述预包被酶标板是采用抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体包被的酶标板，所述酶标记抗体是辣根过氧化物酶标记的抗猪流行性腹泻病毒N蛋白多克隆抗体；所述抗猪流行性腹泻病毒N蛋白多克隆抗体通过用猪流行性腹泻病毒N蛋白免疫兔子，获取兔子血清后纯化获得；所述抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO:C201710的杂交瘤细胞株PEDV分泌。

2.根据权利要求1所述猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA定量检测试剂盒，其特征在于所述猪流行性腹泻病毒N蛋白是通过诱导表达携带SEQ ID NO:1所示N蛋白编码基因的重组菌获得的。

3.根据权利要求1或2所述猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA定量检测试剂盒，其特征在于抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体的包被浓度为2 μg/mL，酶标记抗体的浓度为2μg/mL。

4.根据权利要求3所述猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA定量检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包括标准品冻干粉、样品稀释液、显色剂、终止液和洗涤液；所述标准品冻干粉为PEDV重组N蛋白；所述样品稀释液为0.01mM、pH值为7. 4的PBS缓冲液；所述洗涤液的溶剂是0.01mM、pH值为7. 4的PBS缓冲液，溶质为吐温-20，吐温-20在洗涤液中的体积百分浓度为0.2%；终止液：2M的硫酸水溶液；显色剂包括辣根过氧化物酶催化底物A液和B液；所述辣根过氧化物酶催化底物A液是含有H₂O₂的溶液；所述辣根过氧化物酶催化底物B液是含有3,3',5,5'-四甲基联苯胺的溶液。