[发明专利]一种检测甲氨蝶呤的ELISA试剂盒及其应用在审
| 申请号： | 201710266817.7 | 申请日： | 2017-04-21 |
| 公开（公告）号： | CN107219357A | 公开（公告）日： | 2017-09-29 |
| 发明（设计）人： | 方勇飞;牟方祥;吴红;陈思;闫彩霞;陈欣 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 |
| 主分类号： | G01N33/543 | 分类号： | G01N33/543;G01N33/531 |
| 代理公司： | 北京众达德权知识产权代理有限公司11570 | 代理人： | 刘杰 |
| 地址： | 400038 重*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 蝶呤 elisa 试剂盒 及其 应用 | ||
1.一种检测甲氨蝶呤的ELISA试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括如下试剂：包被甲氨蝶呤的96孔微孔板，甲氨蝶呤单克隆抗体，抗体稀释液，HRP标记羊抗鼠二抗，甲氨蝶呤标准品，洗液浓缩液，样本稀释液，TMB显色液以及终止液；
所述甲氨蝶呤单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO:C201726的杂交瘤细胞所分泌产生。
2.根据权利要求1所述的检测甲氨蝶呤的ELISA试剂盒，其特征在于：所述包被甲氨蝶呤的96孔微孔板的制备方法包括如下步骤：
采用包被缓冲液将包被原稀释，将稀释后的所述包被原加入至微孔中，以封板膜贴封，包被过夜或恒温箱中包被温育2-4h；
所述包被过夜或温育后，甩掉板中液体后拍干，洗板，拍干，每孔加入封闭液，以封板膜贴封，于恒温箱中温育1-3h封闭；
所述封闭后，取板拍干，加入浸板液，于恒温箱中温育1-3h浸板；
所述浸板后，取板拍干，将板抽真空。
3.根据权利要求2所述的检测甲氨蝶呤的ELISA试剂盒，其特征在于：所述包被原包括甲氨蝶呤-鸡蛋清白蛋白。
4.根据权利要求2所述的检测甲氨蝶呤的ELISA试剂盒，其特征在于：所述包被缓冲液包括CB缓冲液；所述洗板的洗液包括1×TBST溶液，所述封闭液包括10×PBS溶液、牛血清以及牛血清白蛋白，所述浸板液包括10×PBS溶液、蔗糖及海藻糖。
5.根据权利要求1所述的检测甲氨蝶呤的ELISA试剂盒，其特征在于：所述抗体稀释液包括10×PBS溶液、2％牛血清白蛋白以及10％牛血清。
6.根据权利要求1所述的检测甲氨蝶呤的ELISA试剂盒，其特征在于：所述样本稀释液包括PBS溶液和溴酚红指示剂。
7.根据权利要求1所述的检测甲氨蝶呤的ELISA试剂盒，其特征在于：所述终止液包括2-3mol/L H 2SO 4溶液。
8.根据权利要求1所述的检测甲氨蝶呤的ELISA试剂盒，其特征在于：所述洗液浓缩液为10×TBST溶液。
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