[发明专利]一种富含脂肪干细胞和细胞外基质的脂肪凝胶制备方法

说明书

技术领域

本发明属于脂肪移植和干细胞治疗领域，尤其涉及一种富含脂肪干细胞和细胞外基质的脂肪凝胶制备方法。

背景技术

脂肪干细胞和基质血管片段细胞在干细胞治疗领域的应用越发广泛，尤其是基质血管片段细胞的应用已在众多国家展开临床试验，其在提高脂肪移植后保存率以及创面修复方面优势明显：1、脂肪组织新鲜分离得到的脂肪干细胞中含有大量的、具有生物学活性的自体脂肪干细胞；2、来源于自身脂肪组织，无免疫排斥反应；3、人体内储量丰富；4、无需体外培养，降低细菌污染的风险。

然而现有技术在获取脂肪凝胶的过程较为复杂，成本较高，对于脂肪凝胶的提取不能达到很好的效果，尤其是不能够去除成熟的脂肪细胞及油脂，因此，不能为脂肪移植提供更好的材料。

发明内容

为了解决上述问题，本发明旨在提供一种富含脂肪干细胞和细胞外基质的脂肪凝胶制备方法，包括以下步骤：

1）用带螺纹注射器抽取移植用脂肪颗粒，在抽取的脂肪颗粒中添加肝素钠，上、下颠倒带螺纹注射器将其混匀；

2）将上述脂肪颗粒放入第一离心管中，以1200g/min速度离心3min，离心后，脂肪颗粒分为上、下两层，去除下层膨胀液后，将上层的脂肪颗粒转移至第一注射器中；

3）将装有脂肪颗粒的带螺纹注射器与第二注射器通过脂肪破碎器连接，推动含有脂肪颗粒的带螺纹注射器的活塞，将脂肪颗粒通过脂肪破碎器推注至对侧的第一注射器中，推注速度为5-10ml/s，如此反复推注50次，得到破碎脂肪；

4）将装有破碎脂肪的第二注射器拧下，通过脂肪乳化器与第三注射器对接，推动含有破碎脂肪的第二注射器活塞，将破碎脂肪通过脂肪乳化器推注至第三注射器中，推注速度为5-10ml/s，乳化一次，得到乳糜状脂肪；

5）将乳糜状脂肪放入到第二离心管中，按照乳糜状脂肪的体积，加入聚乙二醇进行脂肪萃取，将乳糜状脂肪和聚乙二醇的混合物上下缓慢颠倒，可见黄色油脂汇集，并有絮状物生成，完成油脂的抽提；

6）将油脂抽提后混合液装入第四注射器以3000g/min的速度离心10min，离心后，混合液分为上、中、下三层，下层为萃取剂层，中层为脂肪凝胶层，上层为油脂层；

7）轻推第四注射器，去掉下层的萃取剂后，将第四注射器与第五注射器通

过三通对接，收取中层脂肪凝胶层进入第五注射器中，得到高度浓缩的脂肪凝胶。

进一步地，所述步骤1）中的肝素钠浓度为10U/ml。

进一步地，所述步骤3）中的脂肪颗粒通过脂肪破碎器进行脂肪破碎。

进一步地，所述步骤4）中的破碎脂肪通过脂肪乳化器进行乳化和过滤，乳化器的孔径大小为0.6mm，乳化器上孔的数量为9个。

进一步地，所述步骤5）中乳糜状脂肪的体积与聚乙二醇的体积的比例为10:1，用于乳糜状脂肪的絮凝沉淀，从而进行油脂的抽提。

进一步地，所述步骤7）中的中层为高度浓缩的脂肪来源于干细胞和细胞外基质的移植材料。

优选地，所述移植材料用于面部年轻化及软组织损伤修复。

进一步地，所述第一注射器、第二注射器、第三注射器、第四注射器、第五注射器、第一离心管以及第二离心管，在使用前均经过杀菌消毒，并放置于密闭袋中备用。

进一步地，本发明的一种富含脂肪干细胞和细胞外基质的脂肪凝胶脂肪填充材料，其制备方法为上述所述的方法。

本发明的一种富含脂肪干细胞和细胞外基质的脂肪凝胶制备方法的优点在于：

1.本发明在获取脂肪颗粒后，采取了离心的方式，在简单的操作流程下，致使脂肪颗粒先出现简单的分层后，随即去除脂肪颗粒中多余的膨胀液后，为后续的操作提供更为优质的脂肪颗粒。

2.本发明中的脂肪颗粒采用的是特殊结构的专用脂肪破碎器，将脂肪颗粒破碎的更彻底、更均匀。

3.本发明中破碎的脂肪可以通过脂肪乳化器进行乳化操作，而且本发明提供的脂肪乳化器不仅具有乳化破碎脂肪的功能，而且脂肪乳化器上设置有多个孔，孔所在的板相当于筛网，可用来对乳化后的脂肪进行过滤。

4.本发明采用乳糜状脂肪与聚乙二醇的体积比为10:1的比例设置，可对乳糜状脂肪进行油脂的抽提。

5.本发明中采用了3000g/min的离心速率对乳糜状脂肪进行离心，使得乳糜状脂肪达到最佳的分层效果。

6、本发明中采用的注射器在使用前均经过杀菌消毒，并放置于密闭袋中，保证了操作过程的严谨度。