[发明专利]一种分离检测盐酸达卡他韦及其光学异构体的方法

说明书

本发明具体涉及一种分离检测盐酸达卡他韦及其光学异构体的方法。一种用液相色谱法分离测定盐酸达卡他韦及其光学异构体(杂质)的方法，其特征在于，采用以纤维素三(3,5‑二甲基苯基氨基甲酸酯)为填料的手性色谱柱，以水相为六氟磷酸钠、六氟磷酸钾、甲酸、乙酸、磷酸或磷酸盐水溶液与有机相为乙腈或甲醇的混合溶液为流动相。本发明所述分离检测方法可以将盐酸达卡他韦及其光学异构体(杂质)进行有效分离，分离度达到3.0以上，完全基线分离，从而可以准确有效控制盐酸达卡他韦的质量。采用本发明所述的分离方法，分离检测盐酸达卡他韦及其光学异构体的时间在30～80分钟以内，本发明的方法具有简单、快速、准确等优点。

技术领域

本发明涉及分析化学领域，具体涉及用液相色谱法分离测定盐酸达卡他韦及其光学异构体的方法。

背景技术

盐酸达卡他韦(Daclatasvir)，化学名为N,N'-[[1,1'-联苯]-4,4'-二基双[1H-咪唑-5,2-二基-(2S)-2,1-吡咯烷二基[(1S)-1-(1-甲基乙基)-2-氧代-2,1-乙烷二基]]]双氨基甲酸C,C'-二甲酯-二盐酸盐，其结构如下式(1)所示：

盐酸达卡他韦是一种丙型肝炎病毒(HCV)NS5A抑制剂，适用与索氟布韦治疗慢性HCV基因型1或3感染。盐酸达卡他韦含有四个手性中心，本身为一对称结构，有1个对映异构体及8个非对映异构体杂质，在检测盐酸达卡他韦过程中，盐酸达卡他韦(SSSS)与其对映异构体及非对映异构体杂质难以全部分离、检测。

现有技术D1，G.Srinivasu1·K etc.Development and Validation of theChiral HPLC Method for Daclatasvir in GradientElution Mode onAmylose-BasedImmobilized Chiral Stationary Phase，Chromatographia(2016)79:1457–1467.公开了采用液相色谱法分离检测达卡他韦的3个光学异构体(RSSR,RRRR,SRRS)，所述方法采用CHIRALPAK ID-3(固定相为键合直链淀粉-3-氯苯基氨基甲酸酯)手性色谱柱，流动相为“Mobile PhaseA:MeOH/DEA(二乙胺)(100/0.1,v/v)；Mobile Phase B:ACN(乙腈)/DEA(100/0.1,v/v)”，梯度洗脱，并以315nm为检测波长。

现有技术D2中，郭凤等.盐酸达卡他韦中5种光学异构体的HPLC法测定，中国医药工业杂志出版,[J].2016,47(10):130.4-1307.公开了采用高效液相色谱法同时测定盐酸达卡他韦及其5个光学异构体，所述5个光学异构体分别为RSSS，SSRS，RSSR，SRRS，RRRR。所述方法采用Chiralpak IC(固定相为键合纤维素－三(3,5－二氯苯基氨基甲酸酯))色谱柱，以甲基叔丁醚(含0.1％二乙胺):甲醇(88:12)为流动相，检测波长305nm。

在以上所述现有技术中，所公开的分离测定盐酸达卡他韦及其光学异构体的方法均采用正相手性色谱柱，且最多只能检测盐酸达卡他韦及其5个异构体。

发明人曾尝试使用CHIRALPAK IC，4.6mm×250mm，5μm正相手性色谱柱；CHIRALPAKOD-RH，4.6mm×250mm，5μm反相手性色谱柱；phenomenex Lux 5μCellulose-2250×4.6mm反相手性色谱柱；phenomenex Lux 5μCellulose-3250×4.6mm反相手性色谱柱；CHIRALPAKOJ-RH，4.6mm×150mm，5μm反相手性色谱柱等为分析色谱柱；使用相同或不同流动相对供试品进行分析检测，结果显示上述色谱柱对供试品中的盐酸达卡他韦及其异构体的分离效果均较差，或有杂质干扰或峰型差，调节流动相比例亦不能很好的改善；而phenomenex Lux 5μCellulose-1(固定相为纤维素三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯))250×4.6mm，5μm反相手性色谱柱的分离效果较好。

发明内容