[发明专利]用于检测6种呼吸道病毒的LAMP引物组合及其应用

说明书

本发明公开了用于检测6种呼吸道病毒的LAMP引物组合及其应用。本发明提供的引物组合，由序列1至序列36所示的36种DNA分子组成。所述引物组合可应用于检测待测病毒是否为甲型H1N1流感病毒、甲型H3N2流感病毒、H5N1禽流感病毒、H7N9禽流感病毒、乙型流感病毒或人腺病毒，可应用于检测待测样本中是否含有甲型H1N1流感病毒和/或甲型H3N2流感病毒和/或H5N1禽流感病毒和/或H7N9禽流感病毒和/或乙型流感病毒和/或人腺病毒。本发明提供的引物组合用于检测6种呼吸道病毒，具有高特异性和高灵敏度，可以实现简便、快速、准确检测。本发明具有重大的推广价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及用于检测6种呼吸道病毒的LAMP引物组合及其应用。

背景技术

呼吸道感染分为上呼吸道感染与下呼吸道感染。上呼吸道感染90％左右由病毒引起，细菌感染常继发于病毒感染之后。该病四季、任何年龄均可发病，通过含有病毒的飞沫、雾滴、或经污染的用具进行传播。无论是下呼吸道感染还是上呼吸道感染，绝大部分是由病毒引起的，称为病毒性呼吸道感染。

流感病毒属于正黏病毒科，分为甲型流感病毒(如甲型H1N1流感病毒、甲型H3N2流感病毒、H5N1禽流感病毒、H7N9禽流感病毒等)、乙型流感病毒和丙型流感病毒三种。流感病毒是一种严重威胁人类健康的病原体，能感染广泛宿主，每年季节性的流行造成全球约6亿人感染，并导致25-50万人死亡，其中造成感染和死亡的主要是甲型流感病毒。在过去的100多年里，流感病毒至少在全球范围内引发过四次大流行，这几次大流行都是因为动物源性的流感病毒跨越宿主屏障感染人所导致。近年在全球时见报道的主要是H5N1禽流感病毒和H7N9禽流感病毒，比如1997年在香港爆发的H5N1禽流感直接感染人并导致死亡；2013年在上海、安徽等地爆发的H7N9禽流感造成300多人感染，50多人死亡。这些事件证明流感病毒不但造成巨大经济损失，同时还可能跨越宿主屏障直接感染人类，严重威胁人类公共卫生安全。

腺病毒是一种没有包膜的直径为70～90nm的颗粒，由252个壳粒呈廿面体排列构成。衣壳里是线状双链DNA分子。人腺病毒(Human adenovirus，HAdV)为腺病毒科的哺乳动物腺病毒属成员之一，人腺病毒是引起婴幼儿急性呼吸道感染等多种疾病的重要病原体之一。导致急性呼吸道感染的主要流行株为HAdV-3(人腺病毒3型)和HAdV-7(人腺病毒7型)，也可以引起其他系统的疾病，所致疾病的临床表现与其它呼吸道病毒相关病毒相似，但多伴消化道症状。全球很多国家和地区曾发生腺病毒感染暴发，我国曾于上世纪发生严重的腺病毒感染暴发流行。

呼吸道病毒的流行会给整个人类社会带来重大安全问题。开展呼吸道病毒的快速检测，对于重大传染病疫情和生物恐怖的防控具有重要意义。发展针对呼吸道病毒多种病原体的快速检测技术是及时发现传染源，实施及时有效隔离和控制传染源的关键。近年来，分子诊断方法(如聚合酶链式反应)被用于呼吸道病毒的检测，它能够准确地鉴定目标序列，但是它需要有热循环系统的元件，这通常依赖于大型仪器且价格昂贵，不利于开展快速检测。

环介导等温扩增法(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是利用一种具有链置换活性和瀑布式核酸扩增功能的Bst DNA聚合酶，在等温条件下进行核酸的变性和自动循环的链置换核酸扩增反应。LAMP针对靶序列的6个区域设计4条特异引物，利用具备链置换功能的DNA聚合酶在恒定温度下不断复制扩增DNA。为了提高反应效率，可在反应体系中添加两条环引物，使之分别与茎环结构结合，启动链置换合成，循环复制。LAMP具有简便、快速、灵敏、特异的优势，尤其适合在基层开展LAMP试剂盒的应用推广。LAMP技术中，引物是决定检测结果灵敏度和特异性的关键因素。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何检测甲型H1N1流感病毒、甲型H3N2流感病毒、H5N1禽流感病毒、H7N9禽流感病毒、乙型流感病毒和人腺病毒。