[发明专利]一种猪肉中残留瘦肉精的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于荧光纳米材料应用领域，具体涉及一种检测猪肉中残留瘦肉精的方法。

背景技术

克伦特罗是一种人工合成的β-肾上腺素类兴奋剂，俗称“瘦肉精”，开始是治疗支气管哮喘病，特别是慢性病的治疗。20世纪80年代，美国研究人员发现高剂量使用克伦特罗可以促进动物组织生长，提高瘦肉率和分解脂肪的作用。随后，该药物就被广泛的应用于牲畜和家禽生产中。但是，后来的研究表明，克伦特罗极易在牲畜和家禽体内蓄积，当人们长期食用残留克伦特罗的肉制品后，会出现头痛、胸闷、心悸、四肢麻木等不良反应，严重者可以危及生命。所以，为了保证食品的安全，建立一种高效、灵敏、简单、特异性强的克伦特罗残留检测方法具有重要的现实意义。

金纳米簇具有独特的光学和物理化学性质，通常具有强的荧光发射、特征的紫外-可见吸收、双光子吸收及溶剂效应等。而蛋白质保护的荧光金纳米簇在此基础上又具备了高生物兼容性和低毒性，因此它们不仅可作为荧光探针应用于金属离子、生物小分子、蛋白质等的体外检测，而且在生物体内标记和成像等领域也有着广泛的应用。

发明内容

本发明提供一种简单、准确的猪肉中残留瘦肉精的检测方法，用于实际样品中盐酸克伦特罗检测，证明其可操作性良好。

一种猪肉中残留瘦肉精的检测方法，其具体步骤如下：

盐酸溶液与亚硝酸钠溶液反应，生成亚硝酸，再与盐酸克伦特罗进行重氮化反应。

盐酸溶液与亚硝酸钠溶液的摩尔比是1：1。

反应温度为室温。

亚硝酸溶液与克伦特罗的摩尔比是1：2。

猪肉中克伦特罗的提取采用碳酸钠溶液和乙酸乙酯提取。

金纳米簇是由氯金酸与牛血清白蛋白，在碱性条件下，反应12小时制备，经过透析，干燥备用。

本发明所述的具有荧光标记的金纳米簇荧光激发波长为500 nm，发射波长为610 nm。

附图说明

图1本发明具有荧光的金纳米簇的荧光光谱图。

图2盐酸克伦特罗与金纳米簇的荧光响应图。

图3检测盐酸克伦特罗的线性曲线图。

利用本发明中金纳米簇的制备方法，金纳米簇是由氯金酸与牛血清白蛋白，在碱性条件下，反应12小时制备，经过透析，干燥备用。通过荧光光谱图中（见图1），可以看出其荧光激发波长为500 nm（图1a），发射波长为610 nm（图1b）。

图2为盐酸克伦特罗与金纳米簇的荧光响应图。从图中可知，发射波长为610 nm的荧光峰，随着重氮化的克伦特罗的加入，发射峰强度呈现规则的猝灭，在重氮化的CLB加入量到达一定浓度时，是可以猝灭到底的，而且还伴随微小的蓝移。而不重氮化盐酸克伦特罗，则不能对金纳米簇的荧光峰产生影响。

把猪肉样品绞碎，加入碳酸钠溶液和乙酸乙酯，涡旋混匀10 min，置入高速离心机中离心处理，取上清液，然后把盐酸加入到上清液中，充分混匀，离心分离有机层，备用。

图3是盐酸克伦特罗与金纳米簇荧光响应的线性曲线，依据此曲线可以进行猪肉中残留盐酸克伦特罗的含量计算。

具体实施方式

实施例1

一种猪肉中残留瘦肉精的检测方法，具体操作步骤如下：

金纳米簇制备，10 mL，50 mg/mL BSA在37 °C下恒温10 min，加入10 mL, 10 mM 氯金酸水溶液磁力搅拌2 min后，迅速加入1 M的氢氧化钠溶液1 mL，此混合液继续在37°C下磁力搅拌进行反应12 h。制备的金纳米簇粗产品用水透析24 h；再用 G-75凝胶分子筛柱将未反应的牛血清白蛋白去除，冻干后得到金纳米簇粉末。

将盐酸稀释为0.10 mol/L 的水溶液，然后与配制为0.10 mol/L 的亚硝酸钠水溶液按1:1反应，生成亚硝酸，亚硝酸不稳定，迅速加入到不同浓度的盐酸克伦特罗的溶液中，得到盐酸克伦特罗的重氮化衍生物。

将不同浓度的盐酸克伦特罗的溶液加入到等浓度的金纳米簇中，浓度为横坐标，荧光发射峰的强度为纵坐标，绘制标准曲线图。

准确称取绞碎的猪肉5 g， 加入10% 碳酸钠溶液和20 mL的乙酸乙酯，涡旋混匀10 min，置入高速离心机中以5000 r/min，离心处理10 min，取上清液，然后把0.1 M 盐酸 20 mL加入到上清液中，充分混匀5min，在5000 r/min下离心10 min，分离有机层。