[发明专利]抗FtsH2蛋白单克隆抗体及其应用

说明书

本发明提供一种抗FtsH2蛋白单克隆抗体及其应用，所述抗体由小鼠杂交瘤细胞系30749‑22分泌产生；该抗体可用于制备筛选抗逆性状植物材料的试剂盒。本发明的抗FtsH2蛋白单克隆抗体，可特异性地结合识别重组的和小麦叶片中表达的天然FtsH2蛋白；该抗体是一种IgG1类抗体，与FtsH2蛋白的结合有极强特异性和敏感性；并且单克隆抗体可通过免疫印迹(Western blotting)的方法对植物叶片中的FtsH2蛋白进行定性与半定量分析，用于遗传改良植物的鉴定，从而筛选抗逆胁迫性高的植物材料。

技术领域

本发明属于农业生物技术领域，具体涉及一种单克隆抗体，尤其涉及一种抗FtsH2蛋白单克隆抗体及其应用。

背景技术

FtsH(filamentation temperature-sensitive H)属于AAA蛋白酶家族，它是由FtsH基因编码的一种ATP和Zn²⁺依赖型兼职蛋白，兼具ATP酶活性、蛋白水解活性和分子伴侣活性，此基因在生物基因组中广泛分布。

在真核生物中，已知的FtsH均定位于叶绿体膜或线粒体膜上。FtsH负责细菌原生质膜、线粒体膜、叶绿体膜上的未装配蛋白的降解，通过及时降解非复合体形式的自由亚基，避免其可能的有害积累。FtsH不仅参与生物体内正常的代谢调节过程，而且与多种逆境胁迫响应密切相关，在抵抗热激和高渗、盐害和冷胁迫中起作用。FtsH蛋白除了作为蛋白酶发挥功能外，还作为分子伴侣参与蛋白的装配和折叠，这种分子伴侣功能与蛋白酶功能独立存在。发现新的FtsH基因用于作物的遗传改良也具有明确的目标和意义，申请号为201210104976.4的发明专利“一种ATP-依赖的金属蛋白酶FtsH”，提供了一种来自嗜热菌Alicyclobacillus hesperidium的ATP-依赖的金属蛋白酶FtsH编码基因，该蛋白具有蛋白水解活性和分子伴侣活性，可应用于农作物的基因改造。

来自于生物体的FtsH蛋白种类较多，功能也不完全相同。在叶绿体中，主要有FtsH1(又称FTSH蛋白酶1)、FtsH2、FtsH5、FtsH6(又称FtsH蛋白酶6)、FtsH7、FtsH8和FtsH9，在线粒体中则主要存在FtsH3(又称FtsH蛋白酶3)、FtsH4、FtsH10以及FtsH11亚型。

目前，已经在枯草芽孢杆菌、乳酸乳球菌等原核生物；人、酵母、拟南芥、烟草、苜蓿等多种真核生物中都发现了它的存在。经研究表明，FtsH是通过寡聚化形成一个六聚环形结构，将蛋白水解活性位点埋在六聚复合孔穴的中央，结构分析表明，原核生物和真核生物的FtsH蛋白都具有共同的保守模块，包括N端跨膜域、AAA结构域、锌离子结合模块等。

在高等植物中，FtsH参与蛋白质量的平衡控制，还与热激、高渗、光胁迫、低温、病害等胁迫响应答等多种植物应激生理反应过程。近来多个研究报道该蛋白家族成员在不同的植物，如拟南芥、水稻、玉米和大豆中与环境胁迫的耐受有关，这些胁迫包括盐胁迫、干旱胁迫和高温胁迫；但是目前还无抗FtsH蛋白单克隆抗体的相关报道，研发出相关抗体，将其用于筛选抗逆性高的植物材料成为一种发展趋势。

发明内容

因此，本发明的目的是提供一种抗FtsH2蛋白单克隆抗体及其应用，该单克隆抗体可特异性地结合识别重组的和小麦叶片中表达的天然FtsH2蛋白，并且可用于筛选抗逆胁迫性高的植物材料。

除非特别指明，本发明中的“抗体”是指“包括通常意义上的抗体、构成它的重链、轻链，及其片段”。

除非特别指明，本发明中的“30749-22杂交瘤细胞株”、“30749-22杂交瘤细胞株”均指“小鼠细胞系30749-22杂交瘤”。

一方面，本发明提供一种小鼠细胞系30749-22杂交瘤。

另一方面，本发明提供一种抗FtsH2蛋白单克隆抗体，所述抗体由小鼠杂交瘤细胞系30749-22分泌产生。