[发明专利]一种表达IgG抗体的微环DNA载体及其制备方法和应用

说明书

本申请涉及一种表达IgG抗体的微环DNA载体及其制备方法和应用。具体涉及一种用于在体内表达功能完整的IgG抗体的微环DNA载体。所述IgG抗体中和人免疫缺陷病毒(HIV)、其它病原体抗原或癌症细胞抗原。所述微环DNA载体、IgG抗体能够用于预防或治疗艾滋病(或HIV感染)、其它病原体感染或癌症等病症。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种重组基因载体，具体涉及一种用于在体内表达功能完整的IgG抗体的微环DNA载体。

背景技术

单克隆抗体药物自上个世纪80年代批准上市以来，输注体内后结合、中和或清除特定的体内抗原，包括细胞因子、细胞膜表面受体和病原体抗原等。单抗药物广泛应用于免疫相关、癌症和传染病等疾病的预防和治疗，取得了非常好的临床效果。

艾滋病主要是由人免疫缺陷病毒(HIV)感染导致的致死性传染疾病，在全球范围已广泛流行。目前临床上应用的抗HIV药物，辅以高效抗逆转录病毒疗法，可以在一定程度上延长HIV感染者的生存时间和改善其生活质量。但是，由于HIV疫苗研究进展缓慢以及耐药性问题日益明显，研发新型抗HIV药物仍是当务之急。

本发明通过向体内输注含IgG抗体基因序列的微环DNA载体，利用人或动物内源的蛋白合成机制在体内直接生产抗体蛋白药物，达到预防和治疗疾病的效果。与本发明最相近的技术方案包括：用AAV(腺相关病毒)载体表达HIV中和抗体AAV-anti-HIV(WO2012115980)，或者通过细胞培养技术在体外表达纯化HIV中和蛋白或其它IgG抗体。

然而，现有的AAV表达抗体技术存在缺点，包括成本高昂、安全性隐患。具体包括：(a)AAV病毒载体的包装、纯化过程复杂，需要大量细胞培养，耗时耗力；(b)AAV病毒的保存、运输等过程需要低温环境，造成成本上升使用不便；(c)AAV病毒外壳容易激起强烈的免疫反应，而且载体中携带的DNA序列随机插入容易导致基因突变，甚至致癌风险。

同样的，通过细胞培养在体外表达纯化HIV抗体或其它IgG抗体的缺点主要是成本高昂，使用不便。具体包括：(a)抗体体外表达纯化工艺复杂，花费巨大；(b)蛋白保存、运输通常需要低温环境，要求较苛刻；(c)抗体使用需通过静脉或皮下注射，半衰期有限、需长期使用，加大了患者负担。

本发明旨在通过构建重组基因载体(尤其是微环DNA)，并利用重组基因载体表达HIV中和抗体(MC.anti-HIV)，从而起到对艾滋病预防和治疗的双重作用。同时，本发明对其它病原体感染、癌症、自身免疫性疾病或其它病症的预防和治疗提供了可行性和可操作的借鉴和技术教导。

发明内容

本发明涉及一种用于在体内表达功能完整的IgG抗体的微环DNA载体(MC.IgG)，用于体内结合、中和或清除特定的抗原及其关联的细胞或病原体。

本发明提供了一种表达功能完整的IgG抗体的重组基因载体，所述IgG抗体中和抗原，所述抗原选自人免疫缺陷病毒(HIV)或其它抗原，所述其它抗原选自其它病原体、癌症细胞或体内其它抗原。在其他方面中，所述其它抗原还选自与自身免疫性疾病相关的抗原。

在一个实施方案中，优选的，所述重组基因载体选自非病毒基因载体；更优选的，所述重组基因载体选自微环DNA载体。

在一个实施方案中，所述重组基因载体为重组表达载体，选自原核表达载体或真核表达载体。优选真核表达载体，更优选用于哺乳动物细胞真核表达的重组表达载体。

在一个实施方案中，所述IgG抗体包含：如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的重链可变区VH，和如SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的轻链可变区VL。优选的，所述IgG抗体包含：如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的重链，和如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的轻链。