[发明专利]用于血清蛋白质定量测定的肽段组合物及测定方法

权利要求书

1.一种用于血清蛋白质定量测定的肽段组合物，其特征在于，所述肽段组合物包括至少两条同位素标记的肽段，所述肽段的序列包含任意一条序列表SEQ ID NO.1-SEQ IDNO.72中所示的氨基酸序列片段。

2.如权利要求1所述的肽段组合物，其特征在于，所述肽段组合物的肽段摩尔份数为：

3.一种血清蛋白质定量测定方法，其特征在于，所述测定方法包括如下的测定步骤：

S100、样品预处理；

对待测样品进行预处理，将其中的蛋白质酶解为肽段，制得酶解样品；

S200、标准品制备；

将如权利要求1或2所述的肽段组合物溶解，配置两个以上具有不同浓度的肽段组合物标准品溶液；

S300、测定样品制备；

向S100制备的平行酶解样品中分别加入S200制备的任意一个肽段组合物标准品溶液；

加入甲酸溶液，离心去除去氧胆酸钠，制得样品溶液；

S400、样品测定；

采用高效液相色谱-串联质谱测定S300制备的样品溶液；

S500、数据处理；

根据下式计算样品溶液的蛋白质浓度，之后根据处理过程换算为待测样品的蛋白质浓度：

式中：

C_{样品溶液特征肽段相应的特定蛋白质}表示样品溶液特定蛋白质浓度；

Area_{M样品溶液特征肽段}表示样品溶液特征肽段显示的吸收峰面积；

Area_{M标准品特征肽段}表示标准品特征肽段显示的吸收峰面积；

C_{M标准品特征肽段}表示标准品中特征肽段的浓度；

M表示具有不同浓度的标准溶液的个数。

4.根据权利要求3所述的测定方法，其特征在于，所述S300测定样品制备还包括：

S310、固相萃取纯化，所述固相萃取纯化是将S300制备的样品溶液采用固相萃取柱进行纯化；

S320、氮吹回溶，所述氮吹回溶是将S310固相萃取纯化后的样品浓缩后回溶。

5.根据权利要求3所述的测定方法，其特征在于，所述样品预处理包括：

以9倍体积的碳酸氢铵溶液稀释待测样品，制得稀释样品。

6.根据权利要求3所述的测定方法，其特征在于，所述样品预处理还包括：

将所述稀释样品与去氧胆酸钠溶液以及碳酸氢铵溶液混合均匀；

加入三(2-羧乙基)膦溶液，于60℃孵育30～60min；

加入吲哚-3-乙酸溶液，于37℃避光孵育30～60min；

加入二硫苏糖醇溶液，于37℃孵育30～60min；

加入胰蛋白酶溶液，于37℃孵育10～16h，制得酶解样品。

7.根据权利要求5或6所述的测定方法，其特征在于，所述碳酸氢铵溶液的浓度为25mmol/L。

8.根据权利要求6所述的测定方法，其特征在于，

所述三(2-羧乙基)膦溶液的浓度为50mmol/L，所述加入三(2-羧乙基)膦溶液后，三(2-羧乙基)膦的终浓度为5mmol/L；

所述吲哚-3-乙酸溶液的浓度为100mmol/L，所述加入吲哚-3-乙酸溶液后，吲哚-3-乙酸的终浓度为10mmol/L；

所述二硫苏糖醇溶液的浓度为100mmol/L，所述加入二硫苏糖醇溶液后，二硫苏糖醇的终浓度为10mmol/L；

所述胰蛋白酶溶液的浓度为0.9mg/mL，对应每微升待测样品加入胰蛋白酶的量为7～8μL。

9.根据权利要求3所述的测定方法，其特征在于，所述具有不同浓度的标准溶液的个数为3-5。

10.根据权利要求3所述的测定方法，其特征在于，所述甲酸溶液的质量浓度为1％，所述加入甲酸溶液后的甲酸终质量浓度为0.5％。