[发明专利]一种表达羟基化酶的重组菌及其在耦联合成羟脯氨酸中的应用

权利要求书

1.一种表达羟基化酶的重组菌，其特征在于，所述重组菌表达了编码氨基酸序列为SEQID NO：2的基因。

2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌的宿主细胞为大肠杆菌E.coli BL21(DE3)。

3.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1。

4.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌的基因载体为pET28a。

5.权利要求1所述重组菌的构建方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

1)将核苷酸序列为SEQ ID NO：1的基因K1连接到载体pET28a，得到重组质粒pET28a-K1；

2)将重组质粒pET28a-K1转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞，得到重组菌株。

6.一种利用权利要求1所述的重组菌耦联合成反式-4-羟基-L-脯氨酸的方法，其特征在于，在含有L-脯氨酸作为底物的培养基中，对所述重组菌细胞发酵转化耦联合成反式-4-羟基-L-脯氨酸进行三阶段温度调控，从发酵产酶和生物转化两个过程强化产物合成；所述重组菌耦联合成反式-4-羟基-L-脯氨酸的三阶段温度调控过程为：于37℃，220rpm振荡培养3h；将培养条件变为20℃，自诱导表达培养过程20-60h；将温度转为30℃，转化反应过程20-60h。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述培养基为：胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，甘油5g/L，葡萄糖0.5g/L，Alpha-乳糖10g/L，Na₂HPO₄ 7.1g/L，KH₂PO₄ 6.8g/L，NH₄Cl2.68g/L，Na₂SO₄ 0.71g/L，MgSO₄·7H₂O 3mM，CaCl₂ 0.015g/L，FeSO₄·7H₂O 3mM，L-脯氨酸20mM-100mM。

8.权利要求1所述的重组菌在反式-4-羟基-L-脯氨酸生产中的应用。

9.一种反式-4-羟基-L-脯氨酸生产方法，其特征在于，所述方法是利用氨基酸序列为SEQ ID NO:2的基因所表达的酶作为催化剂。