[发明专利]一种提高截短侧耳素菌种发酵产量的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物化工技术领域，基于参数相关分析调控截短侧耳素发酵产生的过程，从而调高发酵效率。

背景技术

泰妙菌素是截短侧耳素衍生的半合成抗生素，作为一种目前较新的动物专用抗生素，泰妙菌素的抗菌作用为抑制感受性细菌蛋白质的合成，即它作用于细菌体内的核糖体，干扰了peptidyl-transferaseregion，主要表现为抑菌作用，在高浓度下才有杀菌作用。泰妙菌素在pH8.5～9.0环境中杀菌作用最强。它对许多革兰氏阳性菌及支原体有特效，特别是对金黄色葡萄球菌、链球菌、多种霉形体及某些螺旋体具有较强的作用。泰妙菌素于1978年开始用于防治猪病，可有效预防和治疗猪的地方流行性肺炎(气喘病)、支原体关节炎、放线杆菌胸膜炎、猪腹泻、猪痢疾、螺旋体病、回肠炎、结肠炎、水肿病、呼吸道病等疾病。与其他药物合用，如土霉素、磺胺增效剂及其他磺胺类药物，可以明显拓宽泰妙菌素的抗菌谱，增强它的治疗效果。该产品仅作为兽用药，避免了人畜共用药的危害，有效地减少了人类交叉耐药菌株的产生。该药已在全球被广泛地使用，并被养猪专家推荐为控制猪支原体感染的首选药物。而作为泰妙菌素的前体——截短侧耳素，其发展直接影响到泰妙菌素市场竞争力，因此研究截短侧耳素的高浓度发酵有着重要的意义。

发明内容：

本发明的目的是提供一种方法满足截短侧耳素发酵产生过程中高耗氧的特点。

本发明的另一个目的提供一种方法控制截短侧耳素发酵产生过程中菌丝形态变化情况。

本发明还有一个目的是提供一种碳源提高截短侧耳素发酵效率的方法。

为实现本发明的技术目的，本发明采用以下技术方案：

（1）菌种活化：从甘油冻存管中取少量菌液，在LB平板上划线后放置于37℃下培养12 h。

（2）种子液制备：从LB平板上取单菌落，接种于LB液体培养基，在28℃，200 r/min条件下摇瓶培养88 h，至菌体湿重增加40%左右。

（3）发酵过程：按 20 %接种量接入发酵罐，28 ℃发酵培养，40 h 后温度控制在 25 ℃，继续培养至 157 h 放罐。截短侧耳素菌种发酵过程是一个高耗氧过程，全程控制溶氧DO值20~100%。

截短侧耳素种子培养及发酵工艺如下:

1、菌丝悬液制备：无菌环境挖去少量菌苔，加入生理盐水，用研磨棒研磨，制备细碎均匀的菌丝悬液。

2、稀释涂布：将1制备菌丝悬液稀释后涂布平板，25℃培养。

3、单菌落转斜面：将2培养好的单菌落在无菌环境挑取并研磨成菌丝悬液后涂布至空白斜面，25℃培养。

4、斜面收取：表面全部长满，均匀一致的白色致密的菌层，散布尤不规则的褶皱，背面有淡黄色色素扩散至琼脂中。

5、效价验证：无菌环境挖去4中斜面小块至种子摇瓶培养基。25℃，200rpm培养约6天。无菌环境吸取5ml至发酵培养基，25℃，200rpm培养192、216、240hr分别送测效价。

6、将5高效价种子作为起始菌株，用于发酵上罐。

本发明的有益效果在于：

本发明的技术方案，使得截短侧耳素的发酵酶活效率提高到12000u/ml以上。

具体实施方案

下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明，本发明的实施例是为了使本领域的技术人员能够更好地理解本发明，但不对本发明作任何的限制。

实施例1

泰妙菌素发酵过程中高耗氧过程所引起的各种参数变化

菌种培养方法：由试管斜面采用挖块法接入种子培养基, 置回转式摇床(偏心距10 cm)200 r/min ，28 ℃培养 88 h ，按 20 %接种量接入发酵罐，28 ℃发酵培养，40 h 后温度控制在 25 ℃，继续培养至 157 h 放罐。