[发明专利]基于RCN2标志物检测的心血管病检测方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于心血管病体外检测技术领域，尤其涉及一种基于人体血液样品中RCN2标志物的浓度水平的心血管病检测方法以及RCN2标志物在心血管病检测中的应用。

背景技术

心血管病是心脏血管疾病的统称，泛指由于高脂血症、血液黏稠、动脉粥样硬化、高血压等所导致的心脏、大脑及全身组织发生的缺血性或出血性疾病。心血管病是一种严重威胁人类，特别是50岁以上中老年人健康的常见病，具有高患病率、高致残率和高死亡率的特点，即使应用目前最先进、完善的治疗手段，仍可有50%以上的脑血管意外幸存者生活不能完全自理，全世界每年死于心血管病的人数高达1500万人，居各种死因首位。

动脉粥样硬化是冠心病、 缺血性中风和外周动脉疾病发生的主要原因。 虽然动脉粥样硬化的死亡率在过去三十年来由于有效的预防和他汀类降脂药物的治疗急剧下降，但这种疾病仍然比任何其他疾病剥夺更多人生命。 氧化低密度脂蛋白附着在内皮下层引起的动脉炎症反应是动脉粥样硬化斑块发生、 发展甚至破裂的的关键过程。目前最有价值的动脉粥样硬化标志物是C-reactive protein (CRP)，CRP 主要在肝脏中产生，并不是动脉粥样硬化特定的。 高水平的 CRP 表明发生了炎症诱导的急性期反应，比如感染、 外伤、 过敏等。 而且CRP的基础水平由基因决定，个人因为基因升高的 CRP 常常显示没有进一步增加患心血管疾病的风险。因此，建立一个能准确地预测氧化低密度脂蛋白诱导的血管壁炎症的标记物将是对抗心血管疾病的一个重要进程。

RCN2（网钙蛋白2）是属于钙腔蛋白中的一种，是一种位于哺乳动物体内的低亲和力钙结合蛋白，在内质网/肌浆网和高尔基体中均有表达。

血小板活化是动脉粥样硬化发生和血栓形成的重要发病机制之一。研究发现经凝血酶等激活后，血小板可释放其胞质中的RCN2作为分泌性蛋白，RCN2能通过自分泌和旁分泌方式参与粥样硬化斑块和血栓形成的病理机制。免疫组化分析显示，在人类有动脉粥样硬化斑块的血管壁上可检测到RCN2存在，而正常血管段则未发现RCN2的表达，进一步的研究发现RCN2是血管内血栓形成的重要条件因素，同时RCN2可影响纤维细胞的表现，促其转化为肌成纤维细胞，参与动脉粥样硬化病灶的形成。

存在上述情况，本发明提供一种基于RCN2标志物检测的心血管病检测方法及使用该方法的试剂盒，其利用亲和素-生物素结合ELISA的方法检测RCN2浓度水平从而检测心血管病，通过使用酶标仪测定吸光度得出RCN2的浓度，当RCN2浓度水平为小于20ng/ml，样品所属人体为健康个体，当RCN2浓度水平为大于20ng/ml，样品所属人体为高患病风险个体。本发明提供的检测方法具有特异性强、检测准确率高的优点。

一种基于RCN2标志物检测的心血管病检测方法，其通过检测RCN2浓度水平从而检测心血管病。

优选地，基于RCN2标志物检测的心血管病检测方法利用亲和素-生物素结合ELISA的方法检测RCN2浓度水平从而检测心血管病。

优选地，基于RCN2标志物检测的心血管病检测方法包括如下步骤：

步骤S111包被抗体：包被缓冲液将RCN2特异性抗体稀释固著于ELISA微孔板上；

步骤S112加入样本：将待测样品与标准蛋白稀释后加至ELISA酶标板孔中，25~40℃孵育1-2小时；

步骤S113加入检测抗体：分别加入生物素标记的RCN2特异抗体，25~40℃孵育1-2小时后，洗涤液洗涤1~5次，每次1~5min；

步骤S114引入酶标：分别加入亲和素交联辣根过氧化物酶结合物，25~40℃孵育1-2小时后，洗涤液洗涤1~5次，每次1~5min；

步骤S115底物反应：分别加入显色底物显色15~30min，加入终止液中止反应；

步骤S116检测：使用酶标仪在450nm处测定样品吸光度，计算出RCN2浓度；

步骤S117结果判断：当RCN2浓度水平为小于20ng/ml，样品所属人体为健康个体，当RCN2浓度水平为大于20ng/ml，样品所属人体为高患病风险个体。

一种基于RCN2标志物检测的心血管病检测试剂盒，该试剂盒是ELISA检测试剂盒，包括：包被有RCN2抗体的ELISA酶标板、检测RCN2抗原的抗体、酶结合物、标准蛋白、样品稀释液、包被缓冲液、封闭液、酶标板洗涤液、显色液和终止液。

优选地，所述的ELISA检测试剂盒中：

所述的酶标板包被抗体为鼠抗人RCN2单克隆抗体；