[发明专利]长牡蛎胞壁水解酶重组蛋白的制备及制备获得的重组蛋白的应用

权利要求书

1.一种长牡蛎胞壁水解酶重组蛋白的应用，其特征在于：长牡蛎（Crassostrea gigas）胞壁水解酶CgCLE-1的重组蛋白在制备抑菌剂中的应用；

所述长牡蛎胞壁水解酶CgCLE-1登录号为Accession NO. XP_011436111.1；

长牡蛎胞壁水解酶重组蛋白的制备，利用酵母表达体系获得长牡蛎胞壁水解酶的重组蛋白；

1）通过长牡蛎血淋巴细胞总RNA，反转录 获得cDNA；

2）在CgCLE-1的Hydolase_2结构域编码区两端分别设计含有限制性酶切位点的引物；

序列为：5’- GAATTCAGAGGAGAACCGATGGAAGCTA-3’，5’-GCGGCCGCCACAAAGTACAGACCCCCGAGTT -3’；

3）以步骤1）获得cDNA为模板，采用步骤2）的引物通过PCR扩增获得该基因片段，并将其克隆到pPICZα A表达载体中构建重组质粒；

4）所述获得重组质粒经ScaI线性化后，电转入宿主细胞毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115中实现真核体外重组表达，而后纯化获得CgCLE-1重组蛋白。

2.按权利要求1所述的应用，其特征在于：所述长牡蛎（Crassostrea gigas）胞壁水解酶CgCLE-1的重组蛋白在制备抑制大肠杆菌、嗜水气单胞菌、金黄色葡萄球菌、灿烂弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌、恶臭假单胞菌或铜绿假单胞菌的抑菌剂中的应用。