[发明专利]一种鱼血琼脂培养基及其制备方法

说明书

本发明提供了一种鱼血琼脂培养基，包括蛋白胨、牛肉膏粉、氯化钠、脱纤维鱼血和琼脂，其中每1000ml培养基中含有蛋白胨5～20g、牛肉膏粉1～10g、酵母粉1～10g、氯化钠1～10g、脱纤维鱼血40～100ml和琼脂10～20g，pH范围为7.0‑8.0。本发明制备的培养基成本低廉，配制程序简单，同时能稳定用于突发性的水产病原细菌分离鉴定，相比于市场上现有的绵羊血琼脂培养基有更好的适用性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种鱼血琼脂培养基配方，该配方适用于鱼类致病菌的培养与筛选。

背景技术

目前常用的病原微生物分离鉴定方法是采集典型患病鱼，经表面消毒，无菌操作取肝、肾、肠等病灶组织样，营养琼脂平板或血琼脂平板划线，30℃±2℃过夜培养后，挑取可疑菌落纯培养。血琼脂平板是一种含有脱纤维动物血(一般用兔血或羊血)的牛肉膏蛋白胨培养基，因此除培养细菌所需要的各种营养外，还能提供辅酶(如V因子)，血红素(X因子)等特殊生长因子。血琼脂培养基常用于分离对营养要求苛刻的某些病原微生物，此外这种培养基还可用来测定细菌的溶血作用。

目前常用的血琼脂基础培养基基本上是在营养琼脂(由蛋白胨、氯化钠、牛肉浸粉、琼脂组成)的基础上添加绵羊血制成。但这一血琼脂培养基保质期很短，成本较高，购买周期长，不能很好的满足水产养殖突发性的疾病的分离、鉴定需求。

因此，研究成本低廉，配制程序简单，同时保证能稳定用于水产病原细菌分离鉴定的培养基，是迫切需要解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种鱼血琼脂培养基，材料易得，制备简便，成本低廉，使其能广泛用于水产病原菌的分离鉴定，提高水产病原菌的鉴定效率。

本发明提供了一种鱼血琼脂培养基，包括蛋白胨、牛肉膏粉、氯化钠、脱纤维鱼血和琼脂，其中每1000ml培养基中含有蛋白胨5～20g、牛肉膏粉1～10g、酵母粉1～10g、氯化钠1～10g、脱纤维鱼血40～100ml和琼脂10～20g，pH范围为7.0-8.0。

本发明中，所述的蛋白胨为以牛肉和牛骨为原料经胰酶消化后制成，市场有已有国产或进口的商业化产品。优选每1000ml培养基中含有蛋白胨10～15g。

本发明中，所述牛肉膏粉以牛肉为原料，经热处理、过滤、浓缩、干燥制成牛肉原粉，再将牛肉原粉经过水解、固液分离、冷藏、过滤、浓缩及干燥等工序获得，能够提供有机酸、核苷酸、矿物质、维生素等营养物质。市场有已有国产或进口的商业化产品。优选每1000ml培养基中含有牛肉膏粉3～8g。

本发明中，所述酵母浸粉以新鲜酵母为原料，能够提供B族维生素和各种氨基酸以及糖类(主要为糖原和海藻糖)。市场有已有国产或进口的商业化产品。优选每1000ml培养基中含有酵母粉3～8g。

本发明中，氯化钠用于维持渗透压。优选每1000ml培养基中含有氯化钠3～8g。

本发明中，培养基中的脱纤维鱼血是细菌生长繁殖的良好营养物质，鱼血可选自青鱼、草鱼、鲢鱼、鳙鱼、鲤鱼、鲫鱼、鳢鱼等，优选青鱼、草鱼、或鲫鱼。选取健康的鱼取血，脱纤维后2-8℃的冰箱中保存备用。制备时优选每1000ml培养基中加入50-80ml脱纤维鱼血制得。

本发明中，培养基pH范围为7.0-8.0，更优选为7.2-7.5。

作为优选，本发明提供了一种鱼血琼脂培养基，其中每1000ml培养基中，含有蛋白胨15g、牛肉膏粉5g、酵母粉5g、氯化钠5g、脱纤维鱼血50ml和琼脂15g，pH范围为7.2±0.2。

本发明的鱼血琼脂培养基配方能够提供全面营养，维持细菌渗透压。本发明制备的培养基成本低廉，配制程序简单，同时能稳定用于突发性的水产病原细菌分离鉴定和培养，相比于市场上现有的绵羊血琼脂培养基有更好的适用性。

具体实施方式