[发明专利]血管内皮生长因子融合蛋白

说明书

本发明的名称为血管内皮生长因子融合蛋白。本发明涉及结合至血管内皮生长因子(VEGFR)和/或胎盘生长因子(PlGF)的融合蛋白。本发明的融合蛋白包含(a)IgG1的Fc结构域，其中两条重链通过二硫键连接，和(b)VEGFR1的四个免疫球蛋白结构域2，其中两个免疫球蛋白结构域2被顺序地融合到(a)的Fc结构域的每条重链。本发明的融合蛋白具有优异的抑制细胞迁移和细胞侵袭的活性，并且对各种癌和成纤维细胞具有高度增强的生长抑制作用。因此，本发明的融合蛋白可用于制备用于治疗癌症或眼病的药剂。

技术领域

本发明涉及血管内皮生长因子受体(VEGFR)融合蛋白，其用于制备治疗癌症或眼病的药剂(agent)。本发明的融合蛋白是多价双特异性抗体，其中VEGFR胞外结构域与免疫球蛋白样结构域的Fc区域融合。

背景技术

血管内皮生长因子(VEGF)是在促进血管发生和血管生成两者中起重要作用的信号蛋白。当血液循环不当时，VEGF起到恢复和向组织供氧的系统的一部分的作用。VEGF的众所周知的功能是在胚胎发育期间、在受伤部位、在运动后的肌肉中以及在脉管(vessel)形成中产生新的血管以绕过阻塞的血管。

然而，增加的VEGF的量可能引起异常的血管生成。尤其地，血管生成与肿瘤发展相关，使得其参与原发性或转移性肿瘤生成。此外，当原发性癌细胞通过血管生成引入血管时，发生癌症转移。据报道，血管生成引起例如哮喘、呼吸困难、子宫内膜异位；急性和慢性炎症，例如动脉粥样硬化和组织水肿；传染病，例如肝炎和卡波西肉瘤；自身免疫性疾病，例如糖尿病、牛皮癣、风湿性关节炎和甲状腺炎；和其他包括糖尿病视网膜病变、脉络膜新生血管形成(CNV)、年龄相关性黄斑变性(AMD)、血管纤维瘤等的疾病(Carmeliet,P.y Jain,RK.2000.Nature 407:249-257；Kuwano M,等2001.Intern Med 40:565-572)。

在血管生成中起重要作用的VEGF主要影响血管内皮细胞。根据体外试验，VEGF刺激内皮细胞的分裂(division)和漂移(wandering)，并且也增加毛细血管通透性。

在哺乳动物中，VEGF被分为5种类型，例如VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D和PlGF(胎盘生长因子)。VEGF-A刺激血管生成、内皮细胞漂移、分裂、血管管腔形成、巨噬细胞和粒细胞的趋化性和血管扩张。VEGF-B促进胚胎血管生成，尤其是心肌组织的发育。VEGF-C加速淋巴管生成，并且VEGF-D对于包围肺细支气管的淋巴管的生长是必需的。此外，PlGF对于血管发生、缺血、炎症、损伤恢复和癌症中的血管生成是重要的。

VEGF受体(VEGFR)——一种其配体为VEGF的受体，由3种亚型(VEGFR1(flt-1)、VEGFR2(Kdr/flk-1)和VEGFR3(flt-4))组成，并且通过基因的可变剪接以膜-结合VEGFR(mbVEGFR)或可溶性VEGFR(sVEGFR)的形式存在。

VEGFR在神经细胞，卡波西氏肉瘤和造血干细胞中表达，而其通常在内皮细胞中被发现。一旦VEGF结合至VEGFR，信号通过受体的二聚化和受体酪氨酸残基的磷酸化被传递。

VEGF以高亲和力结合至其受体VEGFR1和VEGFR2，并且主要通过VEGFR2传递信号，并诱导包括内皮细胞的生长和迁移的血管生成机制。

因此，作为用于抑制或压制由VEGF诱导的血管生成的靶标，已经研究了VEGF和VEGFR2(Ellis和Hicklin,Nature Rev.Cancer,8:579,2008；Youssoufian等,Clin.CancerRes.,13:5544s,2007)。

在先前研究中报道的双特异性抗体或多特异性抗体包括i)由VEGFR1结构域2、VEGFR2结构域3、结构域4和IgG1Fc组成的康柏西普，ii)由VEGFR1结构域2、VEGFR2结构域3和IgG1Fc组成的VEGF-Trap(阿柏西普)和iii)由VEGFR1结构域2、结构域3和IgG1Fc组成的VEGF-Grab。