[发明专利]定量检测Lp‑PLA2的时间分辨荧光免疫分析试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学检验领域，具体涉及一种可定量检测脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)的时间分辨荧光免疫分析试纸条及其制备方法。

背景技术

脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)是磷脂酶A2超家族的一个亚类，又称血小板活化因子乙酰水解酶，分子量45kDa,是一种Ca²⁺依赖性蛋白质。血液中的Lp-PLA2主要由单核/巨噬细胞、T淋巴细胞和肥大细胞分泌，在动脉粥样斑块内的巨噬细胞也能产生Lp-PLA2。血液循环中的约80％的Lp-PLA2黏附在低密度脂蛋白(LDL)上，并且和低密度脂蛋白一起转运到血管内膜。一小部分Lp-PLA2与高密度脂蛋白(HDL)、超低密度脂蛋白(VLDL)和脂蛋白a[Lp(a)]结合。

Lp-PLA2能够水解氧化低密度脂蛋白，导致动脉粥样硬化部分产生大量的溶血卵磷脂和游离的氧化脂肪酸等水解产物，后两者在动脉粥样硬化斑块病变发展和坏死核心形成中起到重要作用。引起单核细胞趋化，内皮功能障碍，诱导内皮细胞表达白细胞黏附因子、血小板源性生长因子和表皮生长因子，这些物质可通过趋化炎症细胞进一步产生自我强化的循环，生成更多促炎物质。

冠状动脉粥样硬化是最常见的狭窄性冠脉疾病，随着疾病进展，可能发展为冠心病心绞痛，甚至心肌梗死。血脂异常、炎症和氧化应激都是动脉粥样硬化发生和发展的重要机制。近年来多项研究表明，人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2通过参与炎症反应而促进动脉粥样硬化的发展，是具有血管特异性的炎症标志物，是动脉粥样硬化事件发生的危险因子和预测因子。Lp-PLA2是独立的心血管疾病预测指标，与心脑血管疾病呈线性相关，而且不受其他风险因子的影响，并且Lp-PLA2还可用于对患者发生不良心血管事件的风险进行分层，进而辅助制定治疗方案，现有技术对Lp-PLA2进行检测是通过免疫增强比浊的方法进行，但该方法是通过测量在546nm波长下反应液OD值的变化对Lp-PLA2进行定量，检测不够灵敏，且在检测过程中，当一束光线通过带有微小粒子的悬浮液和胶体溶液时，溶液受到光散射和光吸收两个因素影响可使光的强度减弱，减弱的程度与溶液中微小粒子的含量成正比，从而导致线性范围较窄，同时该方法中使用的鼠抗人脂蛋白相关磷脂酶A2单克隆抗体被标记在致敏乳胶颗粒上，保存于磷酸盐缓冲液中，液态保存的标记抗体必须长期保存于2-8℃，才能保证其稳定性和检测结果的准确性，导致存储不方便；同时校准周期频繁，操作不便。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种定量检测脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)的时间分辨免疫分析试纸条及其制备方法，采用该免疫分析试纸条具有操作简单、方便快捷、结果准确等优点，适合单人份和较小批量检测用。

本发明提供的一种定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条，包括底板以及依次粘覆在所述底板上相互交错排列的样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，所述结合垫上包被有稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I和稀土离子微球标记的鸡IgY抗体，所述包被膜上包被有检测带和质控带，所述检测带固定有识别不同抗原表位的Lp-PLA2单克隆抗体II，所述质控带固定有羊抗鸡IgY抗体。

优选的，所述结合垫为聚酯膜。

优选的，所述包被膜为硝酸纤维素膜。

优选的，所述检测带和所述质控带相互平行，所述检测带靠近所述结合垫，所述质控带靠近所述吸水纸。

优选的，所述试纸条还包括一壳体，所述试纸条装入壳体内，露出样品垫、结合垫、包被膜上的检测带和质控带、以及吸水垫。

优选的，所述稀土离子微球为用于标记的任何镧系金属元素微球。

优选的，所述稀土离子微球表面带有活性基团，且所述稀土离子微球的直径为100-300nm。

本发明提供定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条的制备方法，包括如下步骤：

(1)在包被膜的不同位置分别固定Lp-PLA2单克隆抗体II和羊抗鸡IgY抗体，形成检测带和质控带；

(2)制备稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I和稀土离子微球标记的鸡IgY抗体，并喷涂在结合垫上；

(3)在底板上依次相互交错的黏贴上样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，然后装入壳体。