[发明专利]定量检测Lp‑PLA2的时间分辨荧光免疫分析试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种定量检测脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)时间分辨荧光免疫分析试纸条，包括底板以及依次粘覆在所述底板上相互交错排列的样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，其特征在于，所述结合垫上包被有稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I和稀土离子微球标记的鸡IgY抗体，所述包被膜上包被有检测带和质控带，所述检测带固定有识别不同抗原表位的Lp-PLA2单克隆抗体II，所述质控带固定有羊抗鸡IgY抗体。

2.根据权利要求1所述一种定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条，其特征在于，所述结合垫为聚酯膜。

3.根据权利要求1所述一种定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条，其特征在于，所述包被膜为硝酸纤维素膜。

4.根据权利要求1所述一种定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条，其特征在于，所述检测带和所述质控带相互平行，所述检测带靠近所述结合垫，所述质控带靠近所述吸水纸。

5.根据权利要求1所述一种定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条，其特征在于，所述试纸条还包括一壳体，所述试纸条装入壳体内，露出样品垫、结合垫、包被膜上的检测带和质控带、以及吸水垫。

6.根据权利要求1所述一种定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条，其特征在于，所述稀土离子微球为用于标记的任何镧系金属元素微球。

7.根据权利要求6所述一种定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条，其特征在于，所述稀土离子微球表面带有活性基团，且所述稀土离子微球的直径为100-300nm。

8.一种根据权利要求1-7中任一项所述一种定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)、在包被膜的不同位置分别固定Lp-PLA2单克隆抗体II和羊抗鸡IgY抗体，形成检测带和质控带；

(2)制备稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I和稀土离子微球标记的鸡IgY抗体，并喷涂在结合垫上；

(3)在底板上依次相互交错的黏贴上样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，然后装入壳体。

9.根据权利要求8所述定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述包被膜的制备方法为：使用含有1％-10％蔗糖的0.01-0.02mol/L的pH为7.2-7.6的磷酸盐缓冲液，分别将Lp-PLA2单克隆抗体II和羊抗鸡IgY抗体稀释到1mg/mL-1.5mg/mL的浓度，使用定量喷膜仪以1μL/cm-2μL/cm的量将二者以0.5cm-1.0cm的间隔喷于包被膜上，35-38℃烘干1-2h，加入干燥剂封存备用。

10.根据权利要求8所述定量检测Lp-PLA2时间分辨荧光免疫分析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述稀土离子微球标记的Lp-PLA2单克隆抗体I的制备方法为：将Lp-PLA2单克隆抗体I用0.01mol/L-0.05mol/L的pH为7.2-7.6的磷酸缓冲液在2℃-4℃温度下透析过夜，之后调整浓度为1mol/L-1.5mol/L；使用0.02mol/L-0.05mol/L的pH为7.2-7.6的MES活化缓冲液洗涤微球，加入碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，终浓度为10mmol/L-20mmol/L，室温反应10-20分钟，充分洗涤微球，用0.02mol/L-0.05mol/L的pH为7.2-7.6的磷酸盐缓冲液复溶后加入透析后的Lp-PLA2单克隆抗体I，使Lp-PLA2单克隆抗体I与微球的质量比为1:50-4:50，室温反应1-2小时，加入含有1％-10％BSA的0.01-0.05mol/L的pH7.2-7.6的磷酸盐缓冲液，室温反应20-35分钟，洗涤微球，用含有0.05％-1％BSA，0.05％-0.1％Tween-20，0.01-0.05mol/L的pH7.2-7.6的磷酸盐缓冲液保存液复溶至原体积，使用定量喷膜仪以3μL/cm-5μL/cm喷涂于聚酯膜上，避光，在35-38℃烘干1-2小时，加入干燥剂封存备用；所述稀土离子微球标记的鸡IgY抗体制备方法为：将鸡IgY抗体用0.01mol/L-0.05mol/L的pH为7.2-7.6的磷酸缓冲液在2℃-4℃温度下透析过夜，之后调整浓度为1mol/L-1.5mol/L；使用0.02mol/L-0.05mol/L的pH为7.2-7.6的MES活化缓冲液洗涤微球，加入碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，终浓度为10mmol/L-20mmol/L，室温反应10-20分钟，充分洗涤微球，用0.02mol/L-0.05mol/L的pH为7.2-7.6的磷酸盐缓冲液复溶后加入透析后的鸡IgY抗体，使鸡IgY抗体与微球的质量比为1:50-4:50，室温反应1-2小时，加入含有1％-10％BSA的0.01-0.05mol/L的pH7.2-7.6的磷酸盐缓冲液，室温反应20-35分钟，洗涤微球，用含有0.05％-1％BSA，0.05％-0.1％Tween-20，0.01-0.05mol/L的pH7.2-7.6的磷酸盐缓冲液保存液复溶至原体积，使用定量喷膜仪以3μL/cm-5μL/cm喷涂于聚酯膜上，避光，在35-38℃烘干1-2小时，加入干燥剂封存备用。