[发明专利]一种犬细小病毒VP2蛋白亚单位疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及亚单位疫苗技术领域，进一步涉及亚单位疫苗免疫效力的增进方法，具体涉及一种犬细小病毒VP2蛋白亚单位疫苗。

背景技术

犬细小病毒病是由犬细小病毒(Canineparvovirus，CPV)引起的一种具有高度接触性的烈性传染病，该病临床上以剧烈的呕吐、出血性肠炎和白细胞显著减少为主要特征。感染犬是本病的主要传染源，病毒随粪便、尿液、呕吐物及唾液排出体外。幼犬发病率和死亡率都很高，多发于3～6月幼龄犬。以其发病率高，传染性强、死亡率高等特点使得该病成为危害我国养犬业最为严重的传染病之一，既严重威胁着家养宠物的身体健康，又对当前我国养犬业、毛皮动物养殖业和野生动物保护业有较大的危害。

VP2蛋白是犬细小病毒的主要结构蛋白，约占总蛋白的90％。VP2蛋白是犬细小病毒主要的免疫保护性抗原，能诱导机体产生具有中和作用的抗体。因此，利用CPV的VP2基因构建基因疫苗免疫幼犬，可以诱导机体产生良好的细胞免疫应答，为基因工程苗的研制提供了可行性。目前，犬细小病毒VP2蛋白亚单位疫苗已经实现了商品化应用，然而在免疫效力方面仍有待提升。

α干扰素是一种具有多种生物活性的细胞因子。长期以来人们对α干扰素的了解是其强大的抗病毒功能，但对其免疫调节活性认识较少。然而，近年来的研究表明α干扰素调节着一些免疫细胞(T细胞、树突状细胞)的分化、存活及功能，显著增强初次抗体反应。虽然现有技术对犬α干扰素研究较为深入，但其免疫调节作用能否与VP2蛋白的免疫原性形成协同作用以强化免疫效果，尚未得到有效认知。此外，α干扰素与VP2蛋白在免疫接种层面如何联用才能起到更好的免疫保护效果也是亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种犬细小病毒VP2蛋白亚单位疫苗，以解决现有技术的犬细小病毒VP2蛋白亚单位疫苗免疫效力较低的技术问题。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种犬细小病毒VP2蛋白亚单位疫苗，所述疫苗中VP2蛋白含量为0.3～0.5mg/ml，所述疫苗中还含有0.6×10⁵～1×10⁵U/ml的犬α干扰素。

作为优选，所述VP2蛋白是通过以下方法制备的：扩增VP2蛋白表达基因，将其克隆至pMD18-T载体上，获得重组克隆载体pMD18-T-VP2；而后将重组克隆载体pMD18-T-VP2导入原核表达载体pET-32a，表达产物，而后从中纯化VP2蛋白。

作为优选，所述疫苗是利用铝胶佐剂与含有VP2蛋白、犬α干扰素的生理盐水按照1:4的体积比混合得到的。

作为优选，所述疫苗中VP2蛋白含量为0.4mg/ml。

作为优选，所述疫苗中犬α干扰素含量为0.8×10⁵U/ml。

本发明提供了一种犬细小病毒VP2蛋白亚单位疫苗，该技术方案在常规VP2蛋白亚单位疫苗的基础上添加了适当水平的犬α干扰素，同时限定了蛋白含量与犬α干扰素间的比例关系。上述改进实现了α干扰素与VP2的联合免疫，以α干扰素对免疫系统的诱导作用与VP2蛋白免疫原性相协同，提升了VP2蛋白亚单位疫苗的免疫效果。这种干扰素VP2亚单位疫苗既具有良好的广谱抗病毒效果，有具有较强的免疫调节作用，即在抑制病毒增殖的同时，又可促进病毒特异性保护免疫的产生。

附图说明

图1是本发明实施例1中不同实验组幼犬执行免疫接种后血清中抗体水平随时间变化图。

具体是实施方式

以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。

以下实施例中所用的试验试剂耗材，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值；以下实施例中的％，如无特别说明，均为质量百分含量。

实施例1

1、VP2蛋白的制备：

利用GenBank中的犬细小病毒毒株VP2基因，设计了一对特异性游引物，扩增出目的片段。将此片段克隆至pMD18-T载体上，获得重组克隆载体pMD18-T-VP2。再将重组克隆载体上的VP2基因亚克隆至原核表达载体pET-32a上，得到的重组表达载体pET-32a-VP2，表达产物经纯化检测后即得VP2蛋白。

2、VP2蛋白亚单位疫苗的制备：