[发明专利]一种长非编码RNA及其在诊断/治疗胆管癌中的应用

说明书

本发明属于基因工程领域，特别涉及胆汁外泌体长非编码RNA(lncRNA)ENST00000588480.1在胆管癌诊断、预后预测及靶点药物治疗中的应用，且与患者的TNM分期和不良预后呈正相关。

技术领域

本发明属于基因工程领域，特别涉及一种长非编码RNA--ENST00000588480.1在诊断及制备胆管癌药物中的应用。

背景技术

胆管癌(Cholangiocarcinoma,CCA)是起源于胆管上皮细胞的恶性肿瘤，起病隐匿，早期诊断困难，平均生存期小于24月，五年生存率小于5％。手术是目前有效的治疗手段，但初诊患者仅30％适合手术，其余已经失去手术机会。因此，早期诊断早期治疗是提高胆管癌患者手术率和生存率的关键。目前胆管癌诊断金标准依靠组织和细胞学病理，临床常用经内镜下逆行胰胆管造影术(Endoscopic Retrograde Cholangiopancreatography,ERCP)行组织活检和细胞学刷片检查，但活检取材困难，刷片诊断阳性率仅约20％。胆汁作为胆管上皮细胞赖以生存的微环境，蕴含丰富的胆道疾病信息，是应用价值很高的液体活检标本。与细针穿刺和组织病理检查相比，体液标本取材方便、可重复、创伤小，可应用于临床实时动态个体化诊疗中。而传统血液和胆汁肿瘤标志物CA199、CEA、CA125的检测主要基于蛋白质组学，具有不统一、特异性不强等缺点。因此，寻找胆管癌特异性肿瘤标记物对早期诊断具有重要理论意义和实用价值。

外泌体exosome是由胞内体分泌而来，晚期内涵体膜向内出芽形成，细胞内多泡体(Multivesicular Body,MVB)与细胞膜融合后释放到细胞外基质中的一种直径约30-120nm的膜性囊泡。Exosome广泛存在于许多体液中如血清、尿液、唾液、腹水、羊水、乳汁等。目前常用超高速差速离心法、聚合沉淀法从体液中提取，两种方法各有优势，前者提取的浓度和纯化率高，后者多使用试剂盒进行提取，具有浓度和纯化率高、样本量少、快速简便等优点。目前报道的2篇关于胆汁样本exosome的提取均采用超高速差速离心法。Exosome可用电镜观察大小和形态，或检测标志物来鉴定exosome，常选取的标志物有Alix、TSG101、CD81、CD82、CD63、CD9、CD24、EpCAM、Hsc70等。研究发现，exosome可通过囊泡运输方式，在体内充当细胞间通讯使者的角色；在免疫应答、凋亡、血管生成、炎症反应及肿瘤发生发展等过程中均有作用；有证据显示，肿瘤来源的exosome有利于致瘤微环境的产生和重建。因脂质双分子层的保护作用，exosome可在体液中稳定存在且半衰期长，且其中的标记蛋白以及非编码RNA可选择性富集，可提供丰富、稳定、灵敏且特异的生物信息。稳定的生物学特性、内容物富集和多样性、非侵入性及检测迅速，使exosome有望成为应用前景广阔的新型循环生物标志物。近年来针对exosome应用于疾病诊断的开发研究逐年增长，其中70％以上均是exosome在肿瘤性疾病中的研究，此外，心血管疾病、肾脏疾病、自身免疫病等多种疾病中也亦有exosome作为疾病循环标志物的相关研究。Exosome作为大分子信息物质的载体，含有丰富的蛋白质、mRNA、非编码RNA等信号分子，其中非编码RNA发挥重要的作用，是现今研究的热点之一。