[发明专利]一株甲基营养芽孢杆菌KACC13105及其应用

说明书

本发明公开了一株甲基营养芽孢杆菌（Bacillus methylotrophicus）及其应用。该菌株目前已保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏日期：2016年12月09日，保藏编号为CGMCC No.13437。该菌株经发酵、提取后对甜菜夜蛾有较好的杀虫活性，在浓度为0.4 mg/mL时，致死率为84.3±1.2%。所述菌株发酵产物能用于制备农用杀虫剂，具有生产工艺简单、周期短、产品成本低等优点，因此在植物虫害生物防治中具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物防治植物害虫领域。具体而言，本发明涉及一株甲基营养芽孢杆菌（Bacillus methylotrophicus）KACC13105及其应用。

背景技术

甜菜夜蛾（Spodoptera exigua Hübner）（鳞翅目：夜蛾科）是我国农牧业生产中的一种重要害虫，尤其对蔬菜、棉花等经济作物为害最重。目前，甜菜夜蛾的危害已遍及20多个省、市和自治区，而对其的防治仍依赖于化学合成农药。由于化学合成农药的滥用和不合理使用，甜菜夜蛾对较多种类的杀虫剂已经产生抗药性，且带来了诸多负面影响，如食品安全（农药残留超标）与环境污染等。

微生物农药因其“环境友好”特性，在国内外获得了又一次发展的机遇。《国家中长期科学与技术发展规划纲要（2006-2020）》和《国家“十二五”科学和技术发展规划》已经将农业生物药物与生态农业作为优先发展方向。据统计，2011年全球生物农药市场价值达13亿美元，2017年有望达到32亿美元；而中国市场由于农药管理制度日趋严格，公众对天然产品需求日益增长，已经成为生物农药发展最快的市场之一。因此，加快微生物农药的研究与开发，已经成为未来绿色农药发展的趋势。

发明内容

本发明的目的为提供一株甲基营养芽孢杆菌（Bacillus methylotrophicus）KACC13105及其应用。该菌株易于规模化发酵生产，其发酵产物经提取分离后对甜菜夜蛾等植物害虫具有较好的杀虫活性，可用于制备微生物杀虫剂，发展前景良好。

本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：

本发明所提供的菌株为甲基营养芽孢杆菌（Bacillus methylotrophicus）KACC13105，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所），保藏日期：2016年12月09日，保藏编号为：CGMCC No. 13437。

甲基营养芽孢杆菌（Bacillus methylotrophicus）KACC13105的保存方法：采用LB固体培养基保存。LB固体培养基：1%胰蛋白胨，0.5%酵母提取物，1% NaCl，1.5%琼脂，蒸馏水，pH调至7.0。

本发明的另一个目的是提供一种甲基营养芽孢杆菌（Bacillus methylotrophicus）KACC13105的发酵方法，其特征是，

1）将保存的甲基营养芽孢杆菌KACC13105接种于LB固体平板表面，30℃培养2-4天，作为规模发酵培养的菌种，待用；

2）将菌种接种于无菌的、盛有LB液体培养基的锥形瓶中，30℃ 120rpm摇床培养10-20天，得到发酵产物待用；所述发酵培养基为：1%胰蛋白胨，0.5%酵母提取物，1% NaCl，蒸馏水，pH调至7.0。

上述发酵产物可以进一步提取，具体包括以下步骤：

1）采用有机溶剂提取，提取液减压蒸馏得浸膏；所述有机溶剂为乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇、乙醇或者正丁醇中的一种或几种，优选乙酸乙酯；