[发明专利]一种从肝素钠副产物中提取舒洛地特原料药的方法

说明书

本发明公开了一种从肝素钠副产物中提取舒洛地特原料药的方法，其特征在于将肝素钠副产物溶解后沉淀，收集沉淀物后经氧化、沉淀、干燥制得，与现有技术比较，本发明提高了舒洛地特产品收率，比其它制备方法收率提高约10%，成本降低约20%。另外，本发明避免了使用班氏试剂引入铜离子污染的风险，减少了使用离心机产生的电力消耗。同时增加了过氧化氢氧化步骤，提升了产品质量，经检测，260nm和280nm吸光度远低于标准要求，可直接用于制备口服制剂和注射液，样品理化性质检测分析结果均符合企业内控质量标准，本发明适于规模化生产，使得肝素钠副产物得以充分利用，具有工艺简易、节能、环保、生产周期短等优势。

技术领域

本发明涉及舒洛地特原料药的制备方法，尤其涉及从肝素钠副产物分离提取舒洛地特原料药的方法，属于生物制药领域。

背景技术

舒洛地特商品名称为：伟素(VESSEL DUE F)，英文名称：Sulodexide，化学名称：葡糖醛酸基葡糖胺聚糖硫酸盐。舒洛地特制剂有胶囊和注射液两种剂型，舒洛地特对动脉和静脉都有较强的抗血栓作用，是目前唯一上市的可口服糖胺聚糖类抗凝血药，其原研企业为意大利阿尔法韦士曼制药公司。

舒洛地特来源于猪小肠粘膜，属于多组分药物，含有72~88%硫酸乙酰肝素(HS orFM-H)、12~28%硫酸皮肤素(DS)和不大于4%的慢移动肝素(SM-H)。HS在生物体内以蛋白聚糖的形式生物合成，HS的一级结构与肝素明显不同，HS中GlcA/ IdoA和GlcNAc/ GlcNS的比值较高，硫酸化程度相对较低。HS的结构域由重复的GlcA-(1→4)- GlcNAc二糖及高度硫酸化的肝素样IdoA(2S)-(1→4)- GlcNS(6S)二糖组成，能够亲和抗凝血酶Ⅲ。DS是一种以(1→3)-β-D-GalNAc(4S)- (1→4)-α-L-Ido 为特征性重复单位的多糖，能够亲和肝素辅因子Ⅱ。因此，舒洛地特具有抗血栓、抗凝、抗心血管疾病、降血脂等多种生物活性。

由粗品肝素经离子交换、分级沉淀生产精品肝素的过程中，产生大量含有硫酸皮肤素、硫酸软骨素、硫酸乙酰肝素、小分子肝素等组分的肝素副产物，目前从肝素钠副产物中分离提纯舒洛地特的方法主要有班氏试剂沉淀、乙醇分级沉淀、离心、树脂离子交换等相结合的方法。CN102603924A公开了一种经醋酸钾沉淀、班氏试剂碱性沉淀、乙醇沉淀、阴离子树脂柱纯化等步骤从肝素副产物提取舒洛地特的方法，该方法尽管具有制备的产品纯度较高的特点，但存在着收率较低、操作步骤繁琐、容易引入杂质等缺陷；CN104017102A公开了一种通过调节溶液高pH值、低pH值、中性pH值，以及结合离心、乙醇沉淀的方法从肝素副产物制备舒洛地特原料的方法，该方法尽管具有简单快速的特点，但存在着低pH值易于破坏糖链结构的风险。

发明内容

本发明旨在通过调整乙醇用量从肝素副产物中提取舒洛地特原料的方法，以克服现有技术存在的弊端。

这种从肝素钠副产物中提取舒洛地特原料药的方法，其特征在于它包括以下步骤：

a．原料溶解 将肝素钠副产物干燥品加水溶解后，加入1%~5%乙酸钠搅拌溶解，然后用醋酸调溶液pH值5.0~8.0，所述肝素钠副产物与水的质量比为1:6~1:20；

b．分级沉淀一 在上述所得溶液中加入溶液体积0.3~0.7倍量的95%的乙醇，搅拌10~30min后，在2~10℃下静置，静置12~36h后收集上清液；

c．分级沉淀二 在步骤b所得上清液中补加95%乙醇，当溶液中补加的乙醇体积为上清液体积的0.1~0.5倍时，搅拌10~30min，然后在2~10℃下静置，静置12~36h后沉淀物与上清液分层，收集沉淀物；

d．氧化 将上述所得沉淀物加水溶解后，用氢氧化钠溶液调节溶液pH值为10.0~11.0，然后升温到25~30℃时，加入1~3%过氧化氢搅拌反应，所述沉淀物与水的质量比为1:3~1:10；