[发明专利]组织工程化软骨移植物及其制备方法在审
申请号: | 201710122315.7 | 申请日: | 2017-03-03 |
公开(公告)号: | CN107185047A | 公开(公告)日: | 2017-09-22 |
发明(设计)人: | 陈洁琳;王大平;刘威;熊建义;刘启颂;黄江鸿;贾兆锋;朱伟民;陈磊;段莉 | 申请(专利权)人: | 深圳市第二人民医院 |
主分类号: | A61L27/44 | 分类号: | A61L27/44;A61L27/24;A61L27/38;A61L27/50;A61L27/56 |
代理公司: | 深圳中一专利商标事务所44237 | 代理人: | 阳开亮 |
地址: | 518000 广东*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 组织 工程 软骨 移植 及其 制备 方法 | ||
1.一种组织工程化软骨移植物,其特征在于,所述组织工程化软骨移植物包括三维支架材料和分散在所述三维支架材料中的脐带间充质干细胞,所述三维支架材料由I型胶原蛋白和II型胶原蛋白制备。
2.如权利要求1所述的组织工程化软骨移植物,其特征在于,所述三维支架材料中的I型胶原蛋白和II型胶原蛋白的质量比为:(99:1)-(1:99)。
3.如权利要求2所述的组织工程化软骨移植物,其特征在于,所述I型胶原蛋白和II型胶原蛋白的质量比为:1:1。
4.如权利要求1所述的组织工程化软骨移植物,其特征在于,所述三维支架材料的制备过程为:
获得所述I型胶原蛋白和II型胶原蛋白原料;
将所述I型胶原蛋白和II型胶原蛋白溶于水中得混合液,并将所述混合液放置于模具中依次进行第一次冷冻、第一次真空干燥,得到初始支架材料;
将所述初始支架材料加入交联剂溶液中进行交联反应,将交联反应后的所述初始支架材料中的剩余交联剂清洗干净后,依次进行第二次冷冻、第二次真空干燥,得到所述三维支架材料。
5.如权利要求4所述的组织工程化软骨移植物,其特征在于,所述混合液放置所述模具前,先将所述混合液于4-5℃条件下,冷存24-48h。
6.如权利要求4所述的组织工程化软骨移植物,其特征在于,所述第一次冷冻的条件为:在等于或低于负20℃的温度下,冷冻24h;所述第一次真空干燥的时间为3-5天;和/或
所述第二次冷冻的条件为:在等于或低于负20℃的温度下,冷冻24h;所述第二次真空干燥的时间为3-5天。
7.如权利要求4-6任一所述的组织工程化软骨移植物,其特征在于,所述交联剂溶液为碳化二亚胺酒精溶液;和/或
所述交联反应的时间为12h。
8.一种组织工程化软骨移植物的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
分别获得脐带间充质干细胞悬液和三维支架材料,所述三维支架材料由I型胶原蛋白和II型胶原蛋白制备;
将所述脐带间充质干细胞悬液接种于所述三维支架材料中吸收后,得细胞-支架复合物,并将所述细胞-支架复合物初始恒温孵育3-5h;
将初始恒温孵育后的所述细胞-支架复合物置于旋转式生物反应器中旋转恒温孵育3-7天,得所述组织工程化软骨移植物。
9.如权利要求8所述的组织工程化软骨移植物的制备方法,其特征在于,所述脐带间充质干细胞悬液接种于所述三维支架材料的细胞个数为:(5-7)×106个。
10.如权利要求8所述的组织工程化软骨移植物的制备方法,其特征在于,所述初始恒温孵育的条件为:温度为37℃,CO2浓度为5%,相对湿度为95%;和/或
所述旋转恒温孵育的条件为:转速为10-50rpm/min,温度为37℃、CO2浓度为5%CO2,相对湿度为95%。
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