[发明专利]一种针对CD22的嵌合抗原受体的重组基因构建及其应用在审
| 申请号： | 201710119499.1 | 申请日： | 2017-03-03 |
| 公开（公告）号： | CN108530541A | 公开（公告）日： | 2018-09-14 |
| 发明（设计）人： | 张同存;柳浥时;顾潮江;廖兴华;汤杰 | 申请（专利权）人： | 武汉波睿达生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 430074 湖北省武汉市东湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 嵌合抗原 重组基因 第三代 构建 转染 单链可变区片段 慢病毒表达载体 逆转录病毒载体 排列组合方式 受体基因片段 阳性肿瘤细胞 共刺激分子 分离纯化 基因编码 抗原受体 受体基因 阳性克隆 质粒载体 重组蛋白 胞内区 胞外区 铰链区 跨膜区 抗原 杀伤 扩增 配体 制备 增殖 串联 应用 克隆 体内 筛选 | ||
1.一种针对CD22的嵌合抗原受体重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白由三个部分串联组成，分别是胞外区，跨膜区和胞内区，其中：
所述胞外区，由针对抗原CD22的抗体可变区串联而成；
所述跨膜区，源自CD8α；
所述胞内区，由三个个不同来源的多肽片段排列组合串联而成。
2. 如权利要求1所述的嵌合抗原受体重组蛋白，其特征在于，编码所述重组蛋白的核苷酸序列为：
(A)具有如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的重组DNA；或
(B)具有与SEQ ID NO.1中所示核苷酸序列≥75％同源性的DNA序列。
3. 如权利要求1所述的嵌合抗原受体重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白的氨基酸序列为：
(A)具有如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的重组蛋白质；或
(B)具有与SEQ ID NO.1中所示氨基酸序列≥85％同源性的多肽或者重组蛋白质。
4.如权利要求2所述的嵌合抗原受体重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白的编码核苷酸，是通过人工合成得到各个部分的核苷酸序列，然后采用PCR扩增拼接而成并克隆到表达载体上。
5.如权利要求4所述的嵌合抗原受体重组蛋白，其特征在于，所述表达载体包括但不限于：质粒载体、慢病毒载体或逆转录病毒载体。
6.如权利要求1所述的嵌合抗原受体重组蛋白，其特征在于，所述胞外区的抗原受体可变区串联单元可以由1到3组相同的，或者不同的VhVl单元组成。
7.如权利要求4所述的嵌合抗原受体重组蛋白，其特征在于，所述编码该重组蛋白的核苷酸，根据其对应的DNA序列，设计并合成多条交错互补的60到80碱基的寡核苷酸，经过退火后，使用T4DNA连接酶链接，再经过PCR扩增获得。
8.如权利要求1所述的嵌合抗原受体重组蛋白，其特征在于，所述胞内区三个多肽片段，是不同排列顺序的任何一种，片段之间直接连接或者使用少于10个氨基酸组成的多肽linker连接而成。
9.如权利要求8所述的嵌合抗原受体重组蛋白，其特征在于，所述胞内区三个多肽片段，包括信号区、共刺激配体和细胞因子，其中，所述信号区来自CD3δ，所述共刺激配体其一来自TNF类配体，其二来自Ig超家族分子细胞因子；所述细胞因子包括IL-2、IL-3、IL-6、IL-7、IL-11、IL-12、IL-15、IL-21或GM-CSF。
10.如权利要求9所述的嵌合抗原受体重组蛋白，其特征在于，所述TNF类配体包括4-1BBL、OX40L、CD70、LIGHT和CD30L；所述Ig超家族分子为CD80和CD86。
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