[发明专利]防治牙周炎的DNA疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种DNA疫苗，为pVAX1-HA2-fimA重组质粒，是由牙龈卟啉单胞菌W83型的牙龈素-血凝素基因编码区的核心功能区HA2基因和菌毛蛋白基因fimA基因经IRES基因序列连接后，插入真核表达载体pVAX1质粒得到。

2.根据权利要求1所述的DNA疫苗，其特征在于，所述的pVAX1-HA2-fimA重组质粒，经酶切去除pVAX1质粒后，得到的HA2-fimA的DNA序列如SEQ ID:2所示。

3.根据权利要求1或2所述的DNA疫苗的制备方法，包括如下步骤：

(1)、牙龈素-血凝素基因编码区的核心功能区HA2和菌毛蛋白基因fimA基因及IRES序列的克隆；

(2)、pVAX1-HA2-fimA重组质粒的构建并转化感受态细胞，筛选重组质粒；

(3)、重组质粒酶切后进行DNA测序鉴定，得到的HA2-fimA的DNA序列如SEQ ID:2所示。

4.根据权利要求3所述的DNA疫苗的制备方法，其特征在于；包括如下步骤：

(1)、牙龈素-血凝素基因编码区的核心功能区HA2、菌毛蛋白基因fimA基因及IRES基因的克隆，HA2和fimA基因通过IRES基因序列连接后得到HA2-fimA重组基因片段；

(2)、将步骤(1)中获得的HA2-fimA重组基因片段插入到pVAX1质粒，构建pVAX1-HA2-fimA重组质粒，并转化感受态细胞DH5α，得到的pVAX1-HA2-fimA重组质粒；

(3)、步骤(2)得到的pVAX1-HA2-fimA重组质粒，经酶切鉴定正确后进行DNA测序，得到的HA2-fimA的DNA序列如SEQ ID:2所示。

5.根据权利要求3或4所述的DNA疫苗的制备方法，其特征在于；

所述步骤(1)的具体操作为：

1)、根据Genbank公布的HA2、fimA以及pIRE2-EGFP的图谱中的IRES序列设计引物，并进行引物合成；

2)、牙龈卟啉单胞菌W83型的培养及基因组DNA的提取；

3)、pVAX1及pIRES2-EGFP质粒的提取；

4)、牙龈素-血凝素基因编码区的核心功能区HA2、菌毛蛋白基因fimA基因及IRES基因的克隆，HA2和fimA基因通过IRES基因序列连接后得到HA2-fimA重组基因片段，HA2-fimA重组基因的PCR扩增。

6.根据权利要求3或4所述的DNA疫苗的制备方法，其特征在于；

所述步骤(2)的具体操作为：将步骤(1)中获得的HA2-fimA重组基因片段插入到pVAX1质粒中，构建pVAX1-HA2-fimA重组质粒，将上述重组质粒转化感受态细胞DH5α，重组质粒酶切鉴定正确后送DNA测序，序列如SEQ ID:2所示；为HA2-fimA重组基因片段。

7.根据权利要求1或2所述的DNA疫苗在制备防治牙周炎的药物或者疫苗中的用途。

8.一种药物或疫苗，包含根据权利要求1或2所述的DNA疫苗以及药学可接受载体。