[发明专利]刺激免疫细胞活化的多肽、融合蛋白及其制备方法

说明书

本申请提供了刺激免疫细胞活化的多肽，其包含如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。本申请还提供了包含上述多肽的融合蛋白、编码所述融合蛋白的核酸分子、含有该核酸分子的重组载体和宿主细胞，以及生产上述融合蛋白的方法。此外，本申请还涉及上述多肽和融合蛋白的医学和生物学用途。

技术领域

本申请大体涉及生物学和免疫学领域，具体而言，本申请提供了刺激免疫细胞活化的多肽、融合蛋白及其制备方法，以及其医学和生物学用途。

背景技术

生物细胞免疫治疗是从患者体内提取免疫细胞在实验室中进行培养后获得的一群抑制细胞，该细胞对肿瘤细胞识别能力很强，如同细胞导弹能精确点射肿瘤细胞，被誉为绿色疗法。细胞免疫治疗技术被称为继手术、放疗、化疗之后的第四种治疗方法：通过采集患者自身免疫细胞，经过体外培养扩增，再回输至患者体内以杀灭癌细胞、病原体，激活人体免疫能力，从而预防肿瘤复发和转移，可在一定程度上解决患者放化疗后免疫力差、生活质量下降的弊端。细胞免疫疗法在国际上已逐渐成为治疗癌症的新趋势。

在生物多细胞免疫治疗之前，免疫治疗中回输到患者体内的“抗肿瘤细胞”主要是树突状细胞(DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)两种。现在，用于患者治疗的“抗肿瘤细胞”增加到了6种：高纯度DC、CIK、自然杀伤细胞(NK)、CD3抗体激活的杀伤细胞(CD3AK)、嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)和自然杀伤T细胞(NKT)。目前，NKT细胞是从人外周血或脐带血经体外分离获得单个核细胞，经刺激后连续培养而获得的。NKT细胞受到刺激后，可以分泌大量的IL-4、IFN-γ、GM-CSF、IL-13和其它细胞因子和趋化因子，发挥免疫调节作用，NKT细胞是联系固有免疫和获得性免疫的桥梁之一。

发明内容

第一方面，本申请提供了多肽，其包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：

(a)如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，以及

(b)由(a)所述的序列经过取代、缺失或添加至少一个氨基酸后得到的且具有刺激免疫细胞活化功能的序列。

在一些实施方案中，本申请的多肽包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

在一些具体的实施方案中，本申请的多肽由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列组成。

在本文中，由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列组成的多肽被命名为NKTP肽。

在一些实施方案中，本申请的多肽序列为由上述(a)所述的序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸后得到的序列，而且经过上述取代、缺失或添加得到的多肽仍具有刺激免疫细胞活化功能。

第二方面，本申请提供了融合蛋白，其包含第一方面所述的多肽以及一个或多个融合伴侣；任选地，所述融合蛋白还包含连接子。

在一些实施方案中，所述融合伴侣包含选自β2-微球蛋白(简称β2M)、Fc区或其部分、免疫球蛋白重链恒定区、蛋白标签、神经酰胺样糖脂抗原中的一个或多个。

在一些实施方案中，所述连接子包含甘氨酸/丝氨酸间隔子。

在一些实施方案中，所述融合伴侣包含β2-微球蛋白、和/或Fc区或其部分、和/或蛋白标签。

在一些具体的实施方案中，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示。

在一些实施方案中，所述融合蛋白的氨基酸序列为与SEQ ID NO：5所示的序列相差至少一个氨基酸的取代、缺失或添加且具有刺激免疫细胞活化功能的蛋白。

第三方面，本申请了提供了多核苷酸，其编码第一方面所述的多肽。

在一些实施方案中，本申请的多核苷酸包含SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列。