[发明专利]一种包含蹄蝠肝炎病毒核心蛋白的重组融合蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种包含蹄蝠肝炎病毒核心蛋白的重组融合蛋白，所述重组融合蛋白由蹄蝠肝炎病毒核心蛋白和插入在所述蹄蝠肝炎病毒核心蛋白的氨基酸之间的外源蛋白质片段组成，所述蹄蝠肝炎病毒核心蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明首次利用蹄蝠肝炎病毒核心蛋白作为外源表位呈递载体，通过优化设计，重组融合蛋白在汉逊酵母中表达形成嵌合病毒样颗粒，该嵌合病毒样颗粒作为疫苗成分，在保证疫苗安全性的前提下，可刺激产生较强的免疫应答，用于预防RSV的感染，具有重要的科学和应用价值。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别涉及一种包含蹄蝠肝炎病毒核心蛋白的重组融合蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus(RSV))是世界范围内引起婴幼儿下呼吸道感染的主要病原体。出生后两年内90％以上婴幼儿至少经历一次RSV感染，6个月以下婴儿、老年人及免疫缺陷人群易发生严重感染及死亡。对于RSV感染引起的疾病，目前唯一有效的上市药物就是帕利珠单抗(Palivizumab)。RSV属于副粘病毒科，肺炎病毒属，是非节段单股负链RNA囊膜病毒。病毒基因组全长15.2kb，包含10个编码基因(依次为NS1、NS2、N、P、M、SH、G、F、M2、L)，共编码11种蛋白，包括3种核衣壳蛋白(N、P、L)、3种跨膜蛋白(F、G、SH)、3种基质蛋白(M、M2-1、M2-2)和2种非结构蛋白(NS1、NS2)。其中G、F两种糖蛋白又被称为粘附蛋白和融合蛋白，分别介导病毒与细胞的黏附和融合，对于病毒侵染宿主细胞具有重要作用，这两种蛋白也是目前疫苗研制的主要靶抗原。根据G蛋白抗原特异性可将RSV分为A和B两个亚型，两型间G蛋白氨基酸序列仅有53％同源性，而F蛋白则有较高氨基酸同源性，高达90％，且以F蛋白作为疫苗抗原可同时预防A和B两个亚型的RSV感染。

F蛋白由F1、F2两个亚基组成，为I型糖蛋白，以三聚体形式存在。F蛋白存在两种状态：亚稳定的融合前与较稳定的融合后状态。目前已发现F蛋白有6个中和抗体表位：I、II、IV、V和VI及融合前抗原位点针对抗原位点I、II、IV均有相应中和单抗研制的报道，其中抗原位点II就是RSV预防及治疗性单抗帕利珠(Palivizumab)及莫维珠(Motavizumab)的结合位点，位于F1亚基的255-278位氨基酸，是“α螺旋-环-α螺旋”二级结构的构象型表位，在F蛋白融合前后构象状态保持不变，因此帕利珠对于融合前和融合后的RSV均具有中和活性。

上世纪60年代经甲醛灭活的RSV疫苗(FI-RSV)在临床试验中出现了严重的ERD现象，免疫后的婴幼儿再次感染RSV时不但没起到预防作用，肺部炎症反应反而加重，最终造成2名婴幼儿死亡。因此在RSV疫苗研发中如何规避ERD现象并提高疫苗的安全性和有效性成为首要考虑问题。目前已有较多的RSV候选疫苗包括减毒活疫苗、重组活病毒疫苗、重组亚单位(G/F蛋白)疫苗和核酸(G/F)疫苗等都处于临床前和临床研究。以Novavax公司、Medimmune公司和GSK公司为代表的研发机构均以RSV F蛋白作为疫苗的靶抗原，且进入临床研究阶段，临床研究数据显示在成人中对于控制和预防RSV感染具有明显作用。

虽然F蛋白有很好的免疫原性，但纯化后的F蛋白免疫棉鼠后进行攻毒试验曾经出现过ERD现象，揭示F蛋白仍存在一定程度的安全风险。同时，不仅由F蛋白制备的疫苗可能会出现ERD现象，其他免疫原蛋白同样会有类似的风险。因此，寻找一种安全有效的针对呼吸道合胞病毒的疫苗极为重要。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对现有技术中的疫苗免疫应答弱，并且存在安全隐患的问题，提供了一种包含蹄蝠肝炎病毒核心蛋白的重组融合蛋白及其制备方法和应用。

为了解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：

一种包含蹄蝠肝炎病毒核心蛋白的重组融合蛋白，所述重组融合蛋白由蹄蝠肝炎病毒核心蛋白和插入在所述蹄蝠肝炎病毒核心蛋白的氨基酸之间的外源蛋白质片段组成，所述蹄蝠肝炎病毒核心蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。