[发明专利]启动子PdeoR及其在指导cry基因表达中的应用

说明书

本发明涉及“启动子P_doeR及其在指导cry基因表达中的应用”。启动子P_doeR，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。与强的cry类启动子P_orf1cry8E相类似，它可以高效地指导cry1Ac基因在苏云金芽胞杆菌中表达。本发明构建了P_doeR驱动cry1Ac表达并产生晶体蛋白的菌株HD^‑P_deoR‑1Ac，发现HD^‑P_deoR‑1Ac菌株的Cry1Ac产量以及对小菜蛾幼虫的杀虫活性均与野生菌株HD73类似。结果证明非cry基因启动子P_deoR在构建苏云金芽胞杆菌工程菌株方面有很好的应用前景，为今后农业生产中改良晶体蛋白或其它杀虫剂提供了新策略。

技术领域

本发明涉及一种新的强启动子P_deoR，能指导苏云金芽胞杆菌cry基因表达，其表达效率与cry8E基因启动子(P_orf1cry8E)相似。

背景技术

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis，Bt)是一种革兰氏阳性菌，属于蜡样芽胞杆菌族(Bacillus cereus group，Bc)(Vilas-Boas GT,Peruca AP,Arantes OM(2007)Biology and taxonomy of Bacillus cereus,Bacillus anthracis,and Bacillusthuringiensis.Can J Microbiol 53(6):673-687 doi:10.1139/W07-029)。苏云金芽胞杆菌在形成芽胞的同时，也会产生具有杀虫活性的伴胞晶体(Bravo A,Likivivatanavong S,Gill SS,Soberón M(2011)Bacillus thuringiensis:A story of a successfulbioinsecticide.Insect Biochemistry and Molecular Biology 41(7):423-431 doi:10.1016/j.ibmb.2011.02.006)。这些晶体主要成分是由cry或cyt基因编码的毒素蛋白，对包括鳞翅目、鞘翅目、双翅目、膜翅目以及线虫等在内的多种昆虫都具有较高的杀虫活性(Schnepf E,Crickmore N,Van Rie J,Lereclus D,Baum J,Feitelson J,Zeigler DR,Dean DH(1998) Bacillus thuringiensis and its pesticidal crystalproteins.Microbiol Mol Biol Rev 62(3):775-806)。 Cry或Cyt毒素的种类多样性决定了苏云金芽胞杆菌对不同昆虫物种的杀虫特异性。基于Bt 杀虫活性好、靶标特异性强、对环境友好等特点，苏云金芽胞杆菌已经作为生防制剂在全世界商业化使用，且占据了现今快速增长的微生物杀虫剂大约50％的市场份额(Gerwick BC, Sparks TC(2014)Naturalproducts for pest control:an analysis of their role,value and future.Pestmanagement science 70(8):1169-1185doi:10.1002/ps.3744；Lacey LA,Grzywacz D,Shapiro-Ilan DI, Frutos R,Brownbridge M,Goettel MS(2015)Insect pathogens asbiological control agents:Back to the future.Journal of invertebratepathology 132:1-41doi:10.1016/j.jip.2015.07.009)。