[发明专利]MrgprX2高表达的重组细胞及MrgprX2高表达膜受体固定相及制备方法和应用有效
申请号: | 201710100941.6 | 申请日: | 2017-02-23 |
公开(公告)号: | CN106754731B | 公开(公告)日: | 2019-10-11 |
发明(设计)人: | 贺浪冲;张涛;韩省力;马维娜;曹娇;贺怀贞;刘瑞;车德路;吕艳妮 | 申请(专利权)人: | 西安交通大学 |
主分类号: | C12N5/10 | 分类号: | C12N5/10;C12N15/867;C07K17/14;G01N33/68 |
代理公司: | 西安通大专利代理有限责任公司 61200 | 代理人: | 岳培华 |
地址: | 710049 陕*** | 国省代码: | 陕西;61 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | mrgprx2 表达 重组 细胞 受体 固定 制备 方法 应用 | ||
1.一种MrgprX2高表达的重组细胞在识别以MrgprX2为靶点的类过敏组分方面的应用,其特征在于:所述类过敏组分为盐酸青藤碱;所述重组细胞是以HEK293细胞为宿主细胞,转染宿主细胞的外源性表达载体是包含MrgprX2全长基因的表达载体;所述MrgprX2全长基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。
2.权利要求1所述的应用,其特征在于:所述包含MrgprX2全长基因的表达载体是慢病毒LV5-MrgprX2。
3.一种MrgprX2高表达的膜受体固定相在识别以MrgprX2为靶点的类过敏组分方面的应用,其特征在于:所述类过敏组分为盐酸青藤碱;所述MrgprX2高表达膜受体固定相由活化硅胶吸附权利要求1-2之一中所述的MrgprX2高表达的重组细胞的细胞膜制成;所述MrgprX2全长基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。
4.权利要求3所述的应用,所述的MrgprX2高表达膜受体固定相的制备方法包括以下步骤:
1)制备细胞膜混悬液
将培养好的MrgprX2高表达的重组细胞离心、清洗,然后在冰浴条件下,将MrgprX2高表达的重组细胞超声破碎,通过差速离心除去细胞器,分离出细胞膜,再将细胞膜用生理盐水重悬,制得细胞膜混悬液;
2)制备MrgprX2高表达膜受体固定相
将硅胶活化后置于具支试管中,真空条件下,向具支试管中加入步骤1)制得的细胞膜混悬液,涡旋振荡,然后静置过夜,得到MrgprX2高表达膜受体固定相。
5.一种MrgprX2高表达的膜受体固定相细胞膜色谱柱在识别以MrgprX2为靶点的类过敏组分方面的应用,其特征在于:所述类过敏组分为盐酸青藤碱;所述MrgprX2高表达的膜受体固定相细胞膜色谱柱由权利要求4中所述的MrgprX2高表达膜受体固定相经湿法装柱后制得;所述MrgprX2全长基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。
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