[发明专利]一种双靶标细胞膜色谱柱及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种双靶标细胞膜色谱柱，其特征在于：所述双靶标细胞膜色谱柱中填充有双靶标细胞膜色谱固定相，所述双靶标细胞膜色谱固定相是由两种具有不同受体的细胞膜色谱固定相混合而成的，所述两种不同受体的细胞膜色谱固定相是由两种表达不同受体类型的细胞的细胞膜分别包裹大孔硅胶制成的。

2.根据权利要求1所述的双靶标细胞膜色谱柱，其特征在于：所述两种不同受体的细胞膜色谱固定相，一种是由高表达IgE受体的RBL-2H3细胞的细胞膜包裹大孔硅胶制成的，另一种是由高表达MrgprX2受体的LAD2细胞的细胞膜包裹大孔硅胶制成的。

3.根据权利要求1所述的双靶标细胞膜色谱柱，其特征在于：所述两种不同受体的细胞膜色谱固定相，一种是由利用基因工程技术构建的高表达EGFR受体的HEK293细胞的细胞膜包裹大孔硅胶制成的，另一种是由利用基因工程技术构建的高表达FGFR4受体的HEK293细胞的细胞膜包裹大孔硅胶制成的。

4.权利要求1所述的双靶标细胞膜色谱柱在筛选识别单组分单靶标、单组分双靶标以及多组分双靶标的目标组分方面的应用。

5.权利要求2所述的双靶标细胞膜色谱柱在筛选识别药物中致敏组分及潜在致敏组分方面的应用。

6.权利要求3所述的双靶标细胞膜色谱柱在筛选识别复杂体系中抗血管生成抑制剂方面的应用。

7.权利要求1-3中任意一项所述的双靶标细胞膜色谱柱的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)分别培养两种表达不同受体类型的细胞，当培养的两种细胞计数分别不低于10⁷个时，去除培养基，分别获得两种细胞；

2)将获得的两种细胞分别用Tris-HCl混悬后置于细胞超声破碎仪中进行破碎，然后通过差速离心分离出两种细胞的细胞膜；

3)用PBS缓冲液将两种细胞的细胞膜分别配制成两种细胞膜悬液，在真空条件下将两种细胞膜悬液分别加入到已预先活化的大孔硅胶内，搅拌均匀后静置过夜，得到两种不同受体的细胞膜色谱固定相；

4)将得到的两种不同受体的细胞膜色谱固定相混合均匀，用装柱机湿法装入柱芯中，即得到双靶标细胞膜色谱柱。

8.根据权利要求7所述的双靶标细胞膜色谱柱的制备方法，其特征在于：所述柱芯的长度为10mm，内径为3.0mm。