[发明专利]高产纳米多聚磷酸体的转基因藻株及其制备方法

权利要求书

1.一种高产纳米多聚磷酸体的转基因藻株，其特征在于，该藻株是在聚球藻7002藻株的基础上，导入含有ppk基因的重组pSyn_1质粒而得到的转基因聚球藻7002藻株；所述ppk基因的前引物:CCCAAGCTTGAAGGAGATAAAAAGTATATGTCCTCTGCG；ppk后引物:CGGGGTACCCTAATCCAAGCTGTCCTGGAG。

2.权利要求1所述的高产纳米多聚磷酸体的转基因藻株的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)目的基因的提取、克隆和修饰：提取聚球藻7002的基因组，根据聚球藻7002ppk基因的序列设计特异引物，引物两端添加相应的酶切位点和核糖体结合位点，通过PCR得到目的基因，纯化备用；

2)目的基因重组到克隆质粒，利用大肠杆菌对克隆质粒和表达质粒进行繁殖，分别对两种质粒进行抽提纯化；

3)对抽提得到的上述两种质粒分别用两种相同的限制酶进行酶切，酶切后的产物进行切胶回收纯化，纯化后的表达质粒和ppk基因按照摩尔浓度1:5-1:10的比例，利用DNA连接酶连接，得到重组表达质粒，通过大肠杆菌进行克隆繁殖，提取纯化备用；

4)将步骤3)提纯后的重组表达质粒加入到聚球藻7002中进行自然转化，再利用含盐酸壮观霉素的固体平板对转化株进行筛选；

5)对筛选得到的藻株进行质粒提取，利用ppk基因特异性引物扩增，对得到的扩增产物进行序列鉴定，得到重组ppk基因的聚球藻7002藻株。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，上述步骤2)中的表达质粒为pSyn_1表达质粒。

4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，上述步骤3)中利用DNA连接酶于16℃连接1-3h。

5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，上述步骤4)具体为，将步骤3)重组后的质粒加入到浓缩10-15倍的新鲜培养液洗涤过的生产状态良好的、OD₇₅₀＝1-2的聚球藻7002，进行自然转化，转化24h即可，再利用含盐酸壮观霉素的固体平板对转化株进行筛选。

6.权利要求1所述的高产纳米多聚磷酸体的转基因藻株在高产纳米多聚磷酸体上的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，该转基因藻株在高产纳米多聚磷酸体过程中，在其培养基中添加0.5-5μM的镍离子进行诱导表达；且在培养基中添加有10μg/L的盐酸壮观霉素。