[发明专利]一种重组人颗粒细胞酶溶液及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种重组人颗粒细胞酶溶液及其制备方法，属于人工辅助生殖技术领域。

背景技术

透明质酸酶(hyaluronidase)是能使透明质酸产生低分子化作用酶的总称，一种能够降低体内透明质酸的活性，从而提高组织中液体渗透能力的酶。透明质酸酶可以有效地消化颗粒细胞间的透明质酸，以便通过剥卵吸管(针)机械地去除卵子周围的颗粒细胞，随后实施单精子注射或者卵子冷冻技术。

现有技术中，常规的透明质酸酶主要来源于动物的睾丸组织，如牛、羊等，存在着潜在的动物源性病原体及毒素的风险，为辅助生殖技术带来安全性问题。

我国辅助生殖技术中的透明质酸酶溶液几乎完全依赖进口成品，不仅成本高且溶液经长途运输和海关检查后，其有效性受到不同程度的影响，甚至变质，如果使用变质的溶液，将对辅助生殖的治疗带来不可逆转的后果和风险。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种各项质控指标达到体外受精培养液标准，使用安全、无病原体和内毒素的消化、去除卵子周围颗粒细胞的重组人颗粒细胞酶溶液及其制备方法。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案是：

一种重组人颗粒细胞酶溶液，其特征在于：采用对卵子进行处理的重组人颗粒细胞酶干粉溶解于含有抗菌素和指示剂的盐溶液中配制而成。

进一步地说，所述抗菌素为庆大霉素，浓度为5-11μg/ml。

再进一步说，所述指示剂为为酚红，浓度9.0-10.0μg/ml；

更进一步说，所述盐溶液是以HEPES或者MOPS为缓冲剂，以钠、钾、镁、钙离子为基础，并以葡萄糖、丙酮酸钠、乳酸钠、白蛋白为能量物质的化合物溶液；其中包含：氯化钠98.11-102.00mmol/L、氯化钾4.55-4.70mmol/L、硫酸镁0.18-0.22mmol/L、氯化钙1.92-2.12mmol/L、碳酸氢钠3.90-4.10mmol/L、缓冲剂19.99-22.00mmol/L、葡萄糖2.68-2.88mmol/L、丙酮酸钠0.31-0.33mmol/L、乳酸钠21.11-21.66mmol/L、磷酸二氢钾0.36-0.39mmol/L；

所述白蛋白为重组人血清白蛋白，是采用医疗级原材料的重组人血清白蛋白干粉溶解于在盐水溶液中制备而成，终浓度为5mg/ml。

本发明所述重组人颗粒细胞酶溶液的制备方法，包括以下步骤：

1、称量好各种组分，备用；

2、称量好的组分中，除了抗菌素、指示剂、碳酸氢钠以外的各组分溶于超纯注射级用水中，溶解过程中遵循先固体后液体的原则；所述超纯注射级用水经0.1-0.μM滤膜过滤的，内毒素＜0.5EU/ml；

3、向步骤2制得的盐溶液中依次加入称量好的抗菌素、指示剂、碳酸氢钠；

4、检测步骤3所得盐溶液的渗透压和pH值，并记录最终渗透压和pH值；所述渗透压保持为250-275mOsm/Kg，所述pH值保持为7.0-7.4；

5、按照预配置的容量，将终浓度为5mg/ml的重组人血清白蛋白补充到盐溶液中；

6、将重组人颗粒细胞酶干粉以30-100单位/毫升的浓度溶解于步骤5制得的盐溶液中，到充分溶解止，制得酶溶液；

7、将步骤6所得酶溶液经过0.2μm滤膜过滤灭菌后，取样测试；测试参数：

A、30-37℃条件下pH值：7.1-7.4；

B、渗透压：270-290mOsm/Kg；

C、内毒素：＜1.0EU/ml；

D.一细胞鼠胚培养到96小时：≥80％的囊胚形成率；

8、将配置好的酶溶液在百级GMP车间进行无菌分装和标签。

有益效果：本发明是利用非动物源性重组的生物工程高科技透明质酸酶(又称重组人颗粒细胞酶)干粉配制的80单位(I.U.)和功能可行浓度的生理工作液，不仅能有效地消化卵子周围的颗粒细胞，以利于卵子的单精子注射(ICSI)技术，而且，能有效地排除动物源性病原体及毒素的可能性，从而大大地提高辅助生殖的安全性。

具体实施方式

下面结合具体实施实施方式对本发明做进一步说明。

本发明所述重组人颗粒细胞酶溶液，采用对卵子进行处理的重组人颗粒细胞酶干粉溶解于含有抗菌素和指示剂的盐溶液中配制而成。

所述抗菌素为庆大霉素，浓度为5-11μg/ml；所述指示剂为为酚红，浓度9.0-10.0μg/ml。