[发明专利]一种回收片段化降解DNA的方法

说明书

本发明公开了一种回收片段化降解DNA的方法。该方法包括：在降解DNA的溶液中加入羧基磁珠，使大片段DNA与羧基磁珠结合，而使小片段DNA保留于溶液中；将结合有大片段DNA的羧基磁珠与包含小片段DNA的溶液分离；使大片段DNA与羧基磁珠分离，再对大片段DNA进行片段化处理，直至形成小片段DNA；回收所述包含小片段DNA的溶液中的小片段DNA以及由大片段DNA经片段化处理形成的小片段DNA。本发明提供的回收片段化降解DNA方法大大提高了片段化降解DNA纯化回收率，为该类样本用于下游分子生物学研究提供了有效保障，且该方法所用试剂成分简单，操作方便，成本低廉，不需特殊设备，并提高片段化降解DNA回收率。

技术领域

本发明涉及一种回收片段化降解DNA的方法，属于分子生物学技术领域。

背景技术

DNA是人类遗传的物质基础，为了弄清DNA在人类遗传和发育过程中的功能和结构，DNA序列的检测成为了研究DNA最重要的手段。随着对DNA信息的海量需求，二代测序诞生了，该技术基于一项边合成边测序技术，代表公司有Roche(454)，Illumina(Solexa)，ABI(SOLID)。二代测序技术最基本的技术就是二代测序文库的构建，文库构建起始首先将待测样本的基因组DNA进行破碎和片段化，主要手段有剪切力，超声波，氮气，酶切等。

影响DNA片段化最关键的因素在于基因组DNA的完整度，完整度高的DNA会获得较好的效果。然而很多临床样本大多为石蜡包埋样本，近年来也出现了很多穿刺及激光微切割样本，这些样本的DNA量少，降解程度高。使用常规DNA片段化及回收手段处理这类样本时，往往因为降解DNA被片段化后，片段过小导致纯化过程中大幅损失，因此降解DNA的片段化回收率低成为了科研人员对这类样本研究中的瓶颈问题。如何提高降解DNA片段化回收率及尽可能保证DNA片段均一成为亟待解决的问题。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种回收片段化降解DNA方法，以克服现有技术中的不足。

为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：

本发明实施例提供一种回收片段化降解DNA的方法，其包括以下步骤：

在降解DNA的溶液中加入羧基磁珠，使大片段DNA与羧基磁珠结合，而使小片段DNA保留于溶液中，所述大片段DNA的尺寸大于2000bp，所述小片段DNA的尺寸为200bp～2000bp；

将结合有大片段DNA的羧基磁珠与包含小片段DNA的溶液分离；

使大片段DNA与羧基磁珠分离，再对大片段DNA进行片段化处理，直至形成小片段DNA；

回收所述包含小片段DNA的溶液中的小片段DNA以及由大片段DNA经片段化处理形成的小片段DNA。

在一些实施方案中，所述一种回收片段化降解DNA的方法包括以下步骤：

(1)取降解DNA溶于水，形成降解DNA溶液；

(2)向降解DNA溶液中加入羧基磁珠，混合均匀后，在室温下孵育，使羧基磁珠与大片段DNA充分结合；

(3)利用磁场作用使羧基磁珠沉降，直至混合液澄清，再分离出羧基磁珠，并收集包含小片段DNA的澄清液；

(4)对羧基磁珠进行清洗；

(5)将羧基磁珠室温干燥后，以洗脱液进行洗脱，并在室温下放置；

(6)利用磁场作用使步骤(5)所获洗脱混合液达到澄清，再将澄清溶液分离出；

(7)将步骤(6)分离出的澄清溶液转移至片段化仪中进行片段化处理，使其中的大片段DNA被打断为小片段DNA；

(8)将步骤(7)所获的含小片段DNA的溶液与步骤(3)所获的包含小片段DNA的澄清液合并；