[发明专利]一种检测汞离子的比色生物传感器及其制备方法

权利要求书

1.一种检测汞离子的比色生物传感器 ，其特征在于，由以下步骤制备而成：

（1）纳米金粒子的制备；

（2）将Probe4修饰到纳米金粒子表面；

（3）将标记的纳米金溶液与均相反应溶液混合；

所述步骤（3）的具体工艺如下：

(1)将10μL 10μM Probe1，10μL 10μM Probe2，10μL 1.0μM Probe3，5μL核酸外切酶Ⅲ400U，8μL 5*PBS和10μL待测物Hg²⁺加入离心管中，震荡30s，放入37℃的水浴锅中反应30min；

（2）将反应好的溶液从水浴锅中取出，再加入标记好的纳米金溶液20μL, 放入37℃的水浴锅中反应1 h；

（3）从水浴锅中取出混合溶液，观察颜色变化，并且用紫外可见分光光度计测定混合溶液的吸收值，据此检测目标物；

所述Probe1的碱基序列如SEQ ID NO：1所示；

所述Probe2的碱基序列如SEQ ID NO：2所示；

所述Probe3的碱基序列如SEQ ID NO：3所示；

所述Probe4的碱基序列如SEQ ID NO：4所示。

2.根据权利要求1所述的比色生物传感器，其特征在于，纳米金粒子的制备步骤如下：

(1) 向三口烧瓶中加入200ml超纯水；

(2) 取500uL，0.04g/ml HAuCl₄于单个包装的离心管中，用移液枪取500ul于 三口烧瓶中，搅拌加热，搅拌速度450转左右，至煮沸；

(3) 在搅拌的条件下，取3ml 1%的柠檬酸三钠溶液快速加入溶液中，几分钟内，溶液颜色由浅黄色变为酒红色，继续加热15min后，撤去热源，慢慢冷却至室温，置于4℃保存备用。

3.根据权利要求1所述的比色生物传感器，其特征在于，将Probe4修饰到纳米金粒子表面的具体操作步骤如下：

(1) 取1 mL纳米金溶液于离心管中，离心10 min，同时离心两管备用；离心至上清液无色透明，去除上清液，加入300 μL灭菌水使纳米金溶液浓缩至3 nM；移入1 mL玻璃瓶中，用锡箔纸封口；

(2) 室温放置30 min后，加入150 μL浓度为30 μM的修饰了-SH的底物探针Probe4，混合均匀后，4 ℃下放置24 h；

(3) 分多次缓慢加入50 μL PB缓冲液，加入磁子搅拌10 min后，继续加入27 μL PBS缓冲液；取出磁子，4 ℃放置48 h；

(4) 将标记好的纳米金溶液转移至离心管中，加入灭菌水至1 mL，离心10 min，去除上清液；再加入1 mL灭菌水离心，此过程重复两次。