[发明专利]一种采用HPLC-DAD-MS测定姜黄次生代谢产物的方法

说明书

本申请涉及一种采用HPLC‑DAD‑MS测定姜黄次生代谢产物的方法。本申请通过采用HPLC‑DAD‑MS分析手段，建立姜黄指纹图谱分析方法，并通过模式识别技术，分析姜黄次生代谢产物，结合紫外、多级质谱数据，对生物标志物进行鉴定。

技术领域：本申请涉及一种采用HPLC-DAD-MS测定姜黄次生代谢产物的方法，属于中药分析测定领域。

背景技术：

姜黄为临床常用于治疗肝胆系统疾病，通过初步研究，我们得出如下结论：姜黄水提物、姜黄醇提物均表现为性温；姜黄提取物的寒温与其姜黄素含量有一定正相关性，即存在一定的“量-性”关系。

发明内容：

为了分析姜黄性温的有效成分群，需要采用HPLC-MS指纹图谱技术，分析姜黄的次生代谢产物、提取物及含药血清图谱间，阐明其体内作用的物质基础。

本申请采用HPLC-DAD-MS分析手段，建立姜黄指纹图谱分析方法，并通过模式识别技术，分析姜黄次生代谢产物，结合紫外、多级质谱数据，对生物标志物进行鉴定。

一种采用HPLC-DAD-MS测定姜黄次生代谢产物的方法，其特征在于，

(1)取姜黄饮片粉碎、过20目筛，精称0.5g粉末，置于具塞三角瓶中，精密加入50mL甲醇，称重后置于超声波提取器中，冰水超声提取40min，取出称重后用甲醇补重，进样前过0.45μm微孔滤膜，

(2)取处理好的样品，上样，其中HPLC-DAD-MS测定的条件为：

固定相：Kromasil C18 5uL 250×4.6mm(E48163)，柱温35℃，流动相：A相：0.1％甲酸水，B相：乙腈，梯度设置：0-20min，10-60％B；20-45min，60-100％B；45-50min，100％B，流速：1.0ml/min，进样量：10μL，DAD检测器的设置：200-400nm(监测波长265nm)，

质谱检测器的设置：

附图说明：

附图1 图1姜黄、郁金HPLC-DAD(265nm)色谱指纹图谱匹配图，(a)姜黄典型色谱图(b) 郁金典型色谱图(c)姜黄、郁金色谱匹配图a.Not identifiedb.Bisdemethoxycurcumin c.Demethoxycurcumin d.Curcumin e.Not identufied f.Ar-turmerone g.Zingiberene，β-bisabolene or β-curcumene h.α，β-turmerone orbisacumol

附图2姜黄、郁金质谱总离子流图(TIC)(A：姜黄，B：郁金)

附图3 PCA主成份分析得分图(scores plot)

附图4 PCA主成份分析载荷图(Loading Plot)

附图5姜黄、郁金主要次生差异代谢产物相对含量比较

附图6(a)姜黄素标品一级质谱图

附图6(b)姜黄素标品分子离子峰(m/z 369)的二级质谱图

附图7生物标志物2的一级质谱图(出峰时间：UV.22.5min，MS：23min)

附图8生物标志物2的紫外全波长扫描图(出峰时间：UV.22.5min，MS：23min)

附图9生物标志物2的二级质谱图(出峰时间：UV.22.5min，MS：23min)

附图10生物标志物3的一级质谱图(出峰时间：UV.23.0min，MS：23.5min)