[发明专利]一种重组鸡干扰素λ（rChIFN‑λ）基因的克隆表达及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种高抗病毒活性重组鸡干扰素λ(rChIFN-λ)，其特征在于:其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.根据权利要求1所述的一种高抗病毒活性重组鸡干扰素λ(rChIFN-λ)的制备方法，其特征在于，由以下步骤制备而成：

a.根据Genbank提供的鸡IFN-λ的基因序列(GenBank no.KF680102.1)设计好去信号肽的引物，用CEF自制扩增所需模板，cDNA，扩增出rChIFN-λ基因片段；

b.将基因克隆至pMD-19T载体，构建克隆载体pMD-19T-rChIFN-λ，测序表明与Genbank提供的鸡IFN-λ基因序列同源性达100％；

c.将pMD-19T-rChIFN-λ与pET32a空载体用EcoR1与Hind3快切酶双酶切，目的基因克隆至pET32a表达载体，转化表达宿主E.coli DH5α,获得重组质粒pET32a-rChIFN-λ；

d.将重组质粒pET32a-rChIFN-λ用BL21感受态转化，扩大培养后，加入IPTG诱导表达，超声破碎后取包涵体，经变性、纯化、复性后收集重组鸡干扰素λ(rChIFN-λ)蛋白。

3.根据权利要求2所述一种高抗病毒活性重组鸡干扰素λ(rChIFN-λ)的制备方法，其特征在于，步骤d中，IPTG诱导浓度为1.0mmol/L，诱导温度为37℃，诱导时间为8h。

4.权利要求1所述的一种高抗病毒活性重组鸡干扰素λ(rChIFN-λ)在制备抑制水疱性口炎病毒(VSV)与流感病毒(H5N6)对DF-1的致病变作用药物中的应用。

5.权利要求1所述的一种高抗病毒活性重组鸡干扰素λ(rChIFN-λ)在制备减少并延迟新城疫病毒(GM)在鸡体内致死作用，抑制排毒量的药物中的应用。