[发明专利]一种量化分析细支卷烟主流逐口烟气中主要微量生物碱的方法

权利要求书

1.一种量化分析细支卷烟主流逐口烟气中主要微量生物碱的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)内标溶液的制备：以正十七碳烷为内标物，使用甲醇为溶剂，制备内标溶液；

(2)标准工作溶液的制备：以麦司明、假木贼碱、新烟草碱等物质的标准品为目标物，使用甲醇为溶剂，经逐级稀释制备成标准储备溶液，然后分别加入一定量的内标溶液，制备成标准工作溶液；

(3)样品溶液的制备：按照标准方法对细支卷烟进行抽吸，固定抽吸口数，用剑桥滤片收集每口烟气的粒相物；然后对每个捕有粒相物的剑桥滤片分别加入一定量的内标溶液、一定体积的稀氢氧化钠溶液和一定体积的萃取溶剂，超声提取，再将提取液离心，取上清液过装有无水硫酸钠的微孔过滤器后，得样品溶液；

(4)气相色谱-串联质谱仪分析：用气相色谱-串联质谱仪(GC-MS/MS)对标准工作溶液和样品溶液进行检测分析；

(5)标准工作曲线的绘制及样品结果的计算；

所述的GC-MS/MS分析，其仪器分析条件为：采用DB-17MS(30m×0.25mm×0.25μm)毛细管色谱柱；载气为氦气，恒流速度为1.0mL/min；进样方式：进样量为1μL，脉冲不分流进样，进样脉冲压力为25psi，时间为0.75min；进样口温度为250℃；传输线温度为280℃；升温程序为初始温度为60℃，保持1min，以5℃/min的速率升高至200℃，再以10℃/min的速率升高至280℃，保持10min；其质谱分析条件为：电离方式为EI源，正离子模式；离子源温度：230℃；四极杆温度：均为150℃；碰撞气：氮气，流速1.5mL/min，载气(氦气)流速为2.25mL/min；多反应监测(MRM)模式，详细参数列于下表：

目标物的MRM参数情况

所述的标准曲线绘制及结果计算如下：以标准工作溶液中目标物与内标的浓度之比为横坐标，以色谱图中目标物与内标的峰面积之比为纵坐标，进行线性回归分析，得到标准工作曲线；将相同条件下测得的样品溶液中目标物与内标的色谱峰面积比，代入标准工作曲线，根据下列公式求得卷烟样品中目标物的含量：

$W=\frac{(\frac{A}{As}-b)\×Ms}{a\×M}$

式中：

W——细支卷烟主流逐口烟气中3种主要微量生物碱的含量，单位为微克每支(μg/支)；

A——3种主要微量生物碱的峰面积；

As——对应内标的峰面积；

b——标准工作曲线的截距；

Ms——添加内标的质量，单位为微克(μg)；

a——标准工作曲线的斜率；

M——烟支的数量，单位为支。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的内标溶液的制备，具体过程为：准确称取0.2g正十七碳烷，精确至0.1mg，于100mL的容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的标准工作溶液的制备具体包括以下步骤：

(1)单标储备液：准确称取10mg麦司明、10mg假木贼碱、5mg新烟草碱标准样品，精确至0.1mg，各移置于50mL的容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度；

(2)混合标准储备液：分别准确移取1mL麦司明单标储备液、0.5mL假木贼碱单标储备液以及1mL新烟草碱单标储备液，混合于50mL的容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度；

(3)标准工作溶液：分别量取混合标准物质储备液0.05mL、0.1mL、0.5mL、1mL、2.5mL和5mL，再分别加入内标溶液25μL，于10mL容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，得到6级系列标准工作溶液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的样品溶液的制备具体包括以下步骤：

(1)卷烟抽吸：按照GB/T 19609标准的要求抽吸20支细支卷烟，固定抽吸口数为5口/支，用44mm剑桥滤片捕集细支卷烟主流烟气中的粒相物；

(2)粒相物萃取：对每个捕有粒相物的剑桥滤片分别加入25μL内标溶液、2.5mL浓度为8％的氢氧化钠溶液，以及10mL萃取溶剂乙酸乙酯，超声提取30min，再将提取液于3000r/min条件下离心5min，取上清液1.5mL装有2g无水硫酸钠的微孔过滤器，分别得到第1口至第5口逐口烟气对应的样品溶液。