[发明专利]嵌合抗原受体及其基因和重组表达载体、CARHER2-NKT细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明属于肿瘤生物制品技术领域，本发明公开了一种嵌合抗原受体及其基因和重组表达载体、工程化HER2靶向性的NKT细胞及其应用，所述嵌合抗原受体为HER2ScFv‑CD8‑CD137‑CD3ζ，包括串联的CD8a信号肽、HER2ScFv、缩短CD8的铰链区和跨膜区、CD137的胞内信号结构域和CD3ζ的胞内信号结构域。本发明的CARHER2‑NKT细胞在治疗进展期HER2阳性的上皮肿瘤时，对上皮肿瘤具有一定的治疗效果。

技术领域

本发明属于肿瘤生物制品技术领域，具体地，涉及过继免疫治疗中的一种嵌合抗原受体HER2ScFv-CD8-CD137-CD3ζ及其基因和重组表达载体、工程化HER2靶向性的NKT细胞(CARHER2-NKT细胞)及其制备方法和应用。

背景技术

自然杀伤细胞(NKT)是一种特殊类型的T淋巴细胞亚群，其既表达T细胞表面标志，又表达NK细胞的表面标志。NKT细胞的抗原识别与传统的T细胞不同，其不能识别由经典的MHC-I、Ⅱ类分子提呈的抗原肽，而只能够被非经典的MHC-I类分子CDId所提呈的糖脂抗原活化，并迅速产生多种细胞因子，如：IL-4、IFN-γ，IL-10、IL-13等，从而能够识别和杀伤突变的肿瘤细胞和病毒感染细胞，而对正常自身组织细胞无毒性作用。NKT细胞通过自身表面的CD16与特异性抗体的Fc段结合，发挥ADCC(antibody-dependent cell-mediatedcytotoxicity)作用。但在抗体依赖的细胞介导的杀伤作用过程中，由于抗体能与靶细胞上的相应抗原表位特异性结合，NKT细胞可杀伤任何已与抗体结合的靶细胞，虽然抗体与靶细胞上的抗原结合是特异性的，但NKT细胞对靶细胞的杀伤作用是非特异性的。通常情况下，输注的NKT细胞在患者体内半衰期为2周左右，有效期短暂，需要反复多次输注。另外，NKT细胞本身缺少特异性抗体，不足以在肿瘤周围或者瘤巢中富集，制约了NKT细胞对恶性肿瘤的靶向治疗。而且，研究表明，NKT细胞不是对所有的肿瘤都有杀伤效果，对部分实体瘤的杀伤作用比较弱，特异杀伤活性有待提高。

HER2，是人类表皮生长因子受体(HER)家族成员之一，在正常的细胞中，HER2能够控制细胞的增殖、迁移、分化等来维持细胞的正常生物学活性。而HER2过度激活后，能够通过影响基因的转录及影响蛋白的稳定性，引起基因表达的改变，激活增殖相关的信号通路，抑制细胞凋亡信号通路，从而增加肿瘤的发生、血管的形成以及肿瘤细胞的迁移等。研究发现在许多表皮肿瘤及癌症中，HER2呈现普遍高表达的现象，包括胆管癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、肝癌、食管癌、前列腺癌、胃癌或口腔癌等。HER2高表达的患者，其肿瘤的侵润性、复发及预后不良程度也很高。基于以上现象，靶向HER2的治疗策略研究具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中NKT细胞对实体瘤的杀伤作用比较弱、特异杀伤活性有待提高的缺陷，提供一种嵌合抗原受体HER2ScFv-CD8-CD137-CD3ζ及其基因和重组表达载体、工程化HER2靶向性的NKT细胞(CARHER2-NKT细胞)及其制备方法和应用。

本发明的发明人在研究中意外发现，本发明的嵌合抗原受体HER2ScFv-CD8-CD137-CD3ζ对NKT细胞具有高的感染效率，且感染后得到的CARHER2-NKT细胞在体外有高效的杀瘤活性，在治疗HER2阳性实体瘤时，对肿瘤细胞具有一定的特异杀伤活性，尤其是在治疗进展期HER2阳性的上皮肿瘤患者时，对上皮肿瘤具有一定的治疗效果。

因此，为了实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体为HER2ScFv-CD8-CD137-CD3ζ，包括串联的CD8a信号肽、HER2ScFv、缩短CD8的铰链区(hinge区)和跨膜区、CD137的胞内信号结构域和CD3ζ的胞内信号结构域。

第二方面，本发明提供了编码上述嵌合抗原受体的基因。

第三方面，本发明提供了含有上述基因的重组表达载体。