[发明专利]一种用于检测中性粒细胞呼吸爆发功能的试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测中性粒细胞呼吸爆发功能的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括如下组分：PMA溶液、DHR123溶液、过氧化氢酶溶液、平衡液、洗涤液、红细胞裂解液和稀释液。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，PMA溶液的浓度是20μg/ml；DHR123溶液的浓度是90μg/ml；过氧化氢酶溶液的浓度是20U/μl。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，平衡液为生理盐水；洗涤液为PBS溶液；稀释液为PBS溶液。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，试剂盒用于检测中性粒细胞呼吸爆发功能的方法如下：

第一步，取受试样本，置于流式细胞管底部，检测分别为静息组、对照组和实验组，每管50μl；若受试样本为血液样本，则每管加入1ml 1x红细胞裂解液，室温避光孵育8～15分钟；然后离心，去除上清，并用洗涤液清洗1-2次，每管加入50μl稀释液；若受试样本为细胞样本，则洗涤后直接加入50μl稀释液；

第二步，向静息组、对照组及实验组中分别加入5μl过氧化氢酶；后向静息组中加入50μl平衡液，对照组及实验组中分别加入50μl DHR123溶液，37℃孵育5分钟；

第三步，向静息组及对照组中分别加入50μl平衡液，实验组中加入50μl PMA溶液，37℃孵育15分钟后立即进行流式细胞术检测；

第四步，将上述静息组、对照组和实验组分别利用流式细胞术检测，圈出中性粒细胞，检测绿色荧光的表达情况，记录每组的平均几何荧光强度；

第五步，计算刺激指数SI，利用如下公式：SI＝实验组平均几何荧光强度/对照组平均几何荧光强度；

第六步，判断受试样本中性粒细胞呼吸爆发功能强弱，分为如下3种情况：

1)利用对于人类慢性肉芽肿患者的临床检验，SI的正常参考值如下：

a.正常值：85.2-264.6；

b.X连锁慢性肉芽肿病：0.9-3.2，部分可>4.5；

c.常染色体慢性肉芽肿病：3.5-52.1；

根据正常参考值判定受试者中性粒呼吸爆发功能缺陷与否；

2)对于其他各种生理病理条件，以及药物作用下中性粒细胞呼吸爆发功能改变的实验室检测，对比对照组的SI值进行判断；

3)对于其他物种中性粒细胞呼吸爆发功能的检测，参照对照组SI值进行判断。