[发明专利]宠物外周血直接冻存试剂和方法

说明书

技术领域

本发明涉及宠物外周血冻存技术领域，具体地说，涉及一种用于宠物外周血直接冻存的试剂及方法。

背景技术

宠物(主要指作为伴侣动物的狗和猫)能够陪伴人类，缓解日常生活中的压力，愉悦心情，促进人类健康，成为家庭中的一员。随着我国经济的发展、老龄化程度的加重，对宠物的需求越来越大。宠物数量增加的同时，宠物食品、宠物用品、宠物培训等产业得到了蓬勃的发展。宠物健康领域并没有受到足够的关注，也尚未形成规范。相比人类健康市场，宠物健康市场有很大的空间尚待挖掘。关爱宠物，关注宠物健康。

宠物外周血中除了占绝大多数的血细胞外，还含有丰富的单核细胞、细胞因子。最近研究表明，通过置换年轻动物和老年动物的血液，可以让年轻动物表现出衰老状态，而老年动物可以返老还童，这些奥秘可能与年轻血液中的细胞因子有关。外周血不仅取材方便，而且功能丰富，其中T淋巴细胞可以经过嵌合抗原受体改造，体外扩增后用于治疗淋巴瘤等恶性肿瘤；NK细胞可以帮助机体抵抗衰老，用于美容；MSC细胞可以有效缓解机体炎症反应，用于治疗关节炎等。然而这些有益效果均取决于一份健康的外周血，一旦宠物衰老或者患病后这些细胞的活力都会显著下降，使用非自体的外周血细胞又会产生免疫排斥反应。因此，在宠物年轻健康的时候为其冻存一份外周血十分必要。

目前市面上尚未有针对宠物外周血直接冻存的产品存在。参考人类健康领域，外周血一般通过两种方式冻存，一种是离心浓缩后加入冻存试剂冻存，另一种是提取血液中的不同细胞进行分别冻存。这两种方式操作上都十分复杂，而且会丢失诸如细胞因子在内的一些有益成分。

发明内容

发明要解决的技术问题

鉴于上述技术课题，发明人反复研究后意外地发现，将二甲基亚砜、羟甲基纤维素钠、MEM培养基配制成冻存试剂，并将二甲基亚砜、羟甲基纤维素钠的浓度调整为远高于传统冻存试剂中的浓度时，可以实现直接冻存的效果，即，使用该浓度的冻存试剂时，无需对外周血进行浓缩离心等操作，将该冻存试剂与外周血以大致1:1的比例混合后直接冻存于-80℃左右，复苏后总细胞活力几乎与新鲜血液相同，可以达到非常优良的冻存效果。

用于解决上述技术问题的方案

(1)一种冻存试剂，包括：羟甲基纤维素钠10～20W/V％，二甲基亚砜15～35V/V％，MEM培养基65～85V/V％。

(2)一种冻存试剂，包括：羟甲基纤维素钠10～15W/V％，二甲基亚砜15～30V/V％，MEM培养基65～85V/V％。

(3)如(1)或(2)所述的冻存试剂，还包括：

聚乙烯吡咯烷酮0.1～0.5W/V％，葡萄糖1～10W/V％，肌苷3～7W/V％，碳酸氢钠0.5～2.5W/V％。

(4)如(1)或(2)所述的冻存试剂在宠物外周血冻存中的用途。

(5)如(3)所述的冻存试剂在宠物外周血冻存中的用途。

(6)一种外周血直接冻存方法，包括如下步骤：

a.将(1)～(3)中任一项所述的冻存试剂分别注入细胞冻存管；

b.采集宠物外周血；

c.30分钟内，将步骤b中采集的外周血加入步骤a的冻存管中，混匀；

d.将冻存管-80±5℃下冻存一天一夜；

e.将冻存管移入液氮长期存储。

发明效果

本发明的宠物外周血冻存试剂可以直接冻存宠物外周血，与传统方法相比，无需对血液进行离心浓缩，最大限度的保留了血液中的有益成分。使用过程中，只需将冻存试剂与血液以大致1：1的比例混合，混匀后可直接在-80℃左右冻存，无需使用传统冻存试剂时的程序降温步骤。除此之外，本发明的宠物外周血冻存冻存方法配合该冻存试剂使用，方便、快捷，效果稳定，冻存的外周血在复苏后，细胞活率高，可以方便宠物在衰老状态及疾病状态时利用自身健康外周血中细胞成分进行美容、治疗关节炎、抗衰老、肿瘤的免疫治疗等。

附图说明

图1是对照组的单核细胞2h差速贴壁100X明场照片。

图2是本发明实施例4的9m单核细胞2h差速贴壁100X明场照片。

具体实施方式

本发明的第一方面是宠物外周血冻存试剂。

本发明的宠物外周血冻存试剂中，主要成分为羟甲基纤维素钠、二甲基亚砜(DMSO)和MEM培养基。