[发明专利]体外核磁信号实时检测方法和检测体系

说明书

本发明提供了体外核磁信号实时检测方法和检测体系。具体地，本发明提供了一种检测体系，所述检测体系为液相体系，包括：(1)顺磁探针(SPP)分子；(2)活细胞；和(3)产生核磁信号的代谢分子。本发明提供一种可以有效屏蔽活细胞外的分子核磁信号，仅实时检测活细胞内代谢分子信号的细胞内核磁检测体系、检测方法及其用途。本发明方法具有原位、实时、无损伤、可定量和高分辨率的特点，可以定量研究代谢分子在细胞内的多种代谢产物随时间的变化过程。

技术领域

本发明涉及活细胞内核磁检测领域。具体地，本发明涉及利用核磁波谱技术针对活细胞跨膜摄入的代谢产物定量检测和产物表征方法。

背景技术

核磁技术是一种被广泛应用于化合物表征和结构解析的技术方法。其中细胞内核磁检测技术主要用于研究细胞代谢组学和相互作用研究，相比于常用的细胞代谢分子的质谱检测技术，核磁技术的优点是无损伤、不需要破碎细胞，真正在活细胞条件下进行测试。同时核磁技术还具有可定量和高分辨的特点。

目前市场上与本发明最相近的检测方案是直接利用活细胞溶液进行核磁检查，其缺点是无法区分活细胞外和活细胞内两种不同环境下都可能存在的同一种物质，进而无法保证所测量的核磁信号只有而且仅有活细胞内的分子信息。而且，也无法直接实时测量活细胞从体外摄入代谢分子的动态过程。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可以有效屏蔽活细胞外的分子核磁信号，仅实时检测活细胞内代谢分子信号的细胞内核磁检测体系、检测方法及其用途。

在本发明的第一方面，提供了一种检测体系，所述检测体系为液相体系，并且所述液相体系中含有：

(1)顺磁探针(SPP)分子；

(2)活细胞；和

(3)产生核磁信号的代谢分子。

在另一优选例中，所述液相体系为水相体系。

在另一优选例中，所述顺磁探针(SPP)分子为可溶性的顺磁探针分子。

在另一优选例中，所述顺磁探针(SPP)分子选自下组：

(a)Gd-DOTA或其衍生分子；

(b)Gd-DTPA-BMA或其衍生分子；

(c)TEMPOL或其衍生分子；

(d)Gd-EDTA或其衍生分子；

(e)Ln-(DPA)₃或其衍生分子；

(f)上述(a)-(e)的任意组合。

在另一优选例中，在所述液相体系中，所述顺磁探针(SPP)分子的浓度为0.5-50mM，较佳地为1-30mM，更佳地为3-10mM。

在另一优选例中，所述活细胞选自：原核细胞、真核细胞或其组合。

在另一优选例中，所述活细胞选自：植物细胞、动物细胞、细菌细胞、酵母细胞、病毒细胞。

在另一优选例中，所述活细胞选自：非人哺乳动物细胞、人的细胞。

在另一优选例中，所述活细胞选自：正常细胞、肿瘤细胞。

在另一优选例中，所述活细胞选自：U937、Hela、HepG2、NKNT-3、CHO细胞。

在另一优选例中，所述活细胞包括悬浮培养细胞和贴壁培养细胞。