[发明专利]猪圆环合成肽疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种用于制备猪圆环合成肽疫苗的抗原多肽、多肽组合物及疫苗。抗原多肽为序列1或序列2所示的多肽。本发明的疫苗包括多肽或多肽组合物。本发明提供的猪圆环合成肽疫苗具有良好的免疫效力，并且不会引发传统疫苗存在的发热、红肿等问题，因此本发明的疫苗可以有效应对目前猪圆环病毒的抗原变异、不存在生物安全性，易于大规模合成，具有良好的应用前景。本发明还提供了所述多肽和多肽疫苗的制备方法以及其制药用途。

技术领域

本发明涉及本发明属于医药技术领域，具体而言，本发明涉及一种猪圆环合成肽疫苗以及其制备方法和应用。

背景技术

猪圆环病毒病(porcine circovirus-associated disease,PCVAD)是指由PCV2引起的一系列综合症候群或与PCV2感染有关的疾病。根据PCV抗原性和基因组成不同，将其分为两种基因型(血清型)，与临床疾病相关的猪圆环病毒命名为猪圆环病毒2型(PCV2)，无临床致病性的猪圆环病毒命名为猪圆环病毒1型(PCV1)。猪圆环病毒是迄今为止发现的一种最小的动物病毒，直径17nm，二十面体对称，无囊膜。病毒基因组由单股负链闭合环状DNA组成，其中PCV1含有1759个核苷酸，PCV2含有1767或1768个核苷酸。

PCV2感染机体后侵害其单核细胞和巨噬细胞，导致猪的免疫抑制及机体抵抗力降低，干扰和破坏猪对其他疾病免疫抗体的产生和维持，造成多种疾病的并发或继发感染。猪在感染PCV2病毒后，可以通过胎盘垂直传播给新生仔猪，还可通过粪便等进行水平传播。PCV2病毒耐环境因素能力强，对各种消毒剂都有很强的抵抗性，即使在高温及酸性环境下仍能存活一段时间，猪场很难得到净化。该病毒会存在于机体的多个器官中，尤其是肺脏和淋巴结中，导致相应器官出现功能异常等症状。感染猪不仅会出现呼吸功能障碍，更会因为抑制机体免疫而导致抵抗力下降，提高其它疾病患病可能，包括断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎肾病综合征(PDNS)、猪呼吸系统混合疾病(PRDC)、猪繁殖障碍症、肉芽肿性肠炎、急性肺水肿(APE)、增生性坏死性肺炎(PNP)等病症。

猪圆环病毒病于1997年在加拿大西部首次被证实，相继北美、欧洲及亚洲多数国家均有本病流行的报道。该病的发病率可达50％，死亡率可能因猪场条件、继发感染情况而不同，一般在5％～7％。猪圆环病毒病中，以PMWS对养猪业造成的危害最为严重，在欧洲，该病每年可造成养猪业约6亿欧元的损失。

大量的行业养殖现状和试验研究表明，控制PCV2感染的有效手段是对仔猪进行疫苗免疫。目前市售的PCV2商品化疫苗主要为进口的病毒载体疫苗和国产灭活疫苗。这两种疫苗在我国防控PCV2感染发挥了重要作用，但同时也存在灭活疫苗病毒难以培养、生产中批间质量较难统一、生产工艺需要进一步改进等困难，使得灭活苗制备产量不高，同时还存在散毒的危险。而杆状病毒载体疫苗虽然能保证疫苗的稳定性和一致性，容易将免疫动物与感染动物区分开来，但价格昂贵，许多猪场不能大量采购，所以对我国猪圆环病毒病的控制效果有限。由于PCV2疫苗在传统在制备方法或价格上仍然存在缺陷，因此开发高效低廉的新型疫苗逐渐受到学者们的关注。近年来，越来越多的学者将注意力转移至亚单位和多肽疫苗的研究，多肽抗原作为完整病毒蛋白的一部分，其不具备传染疾病的危险性，并且可以大量合成生产，因此已成为疫苗研究开发的重要内容之一。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于制备猪圆环病毒合成肽疫苗的抗原多肽，多肽组合物，以及含有该多肽组合物的疫苗。

为实现上述目的，本实验室根据PCV2-Cap基因抗原表位共设计了2条氨基酸组成的多肽序列，分别为SEQNO.1及SEQNO.2多肽序列，采用固相法合成，与ISA50V佐剂混合制成油乳剂疫苗。通过动物安全性和效力性研究，证明在最小日龄仔猪单剂量、仔猪重复接种、仔猪一次超剂量、和怀孕母猪双倍剂量情况下对猪都是安全的。免疫仔猪后不同时间测定ELISA抗体、中和抗体，并用ELispot方法检测IFN-γ细胞因子，免疫35天后，ELISA抗体和中和抗体达1:4160和1:25.6，IFN-γ细胞因子表达水平明显升高。